鸭瘟病毒TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立及应用
文献类型: 中文期刊
第一作者: 于江玮
作者: 于江玮;程慧敏;林健;杨宝琳;黄程;杨志远;胡格
作者机构:
关键词: 鸭瘟病毒;US6基因;TaqMan探针;荧光定量PCR;增殖规律;人工感染
期刊名称: 畜牧兽医学报
ISSN: 0366-6964
年卷期: 2025 年 56 卷 002 期
页码: 765-773
收录情况: 北大核心 ; CSCD
摘要: 为建立一种鸭瘟病毒(duck plague virus, DPV)TaqMan荧光定量PCR快速检测方法,基于DPV US6基因保守序列设计特异性引物和探针,构建重组质粒DPV-US6标准品,对方法敏感性、特异性和重复性进行评价,并应用于DPV在鸡胚成纤维细胞(CEF)上增殖及人工感染鸭器官组织上分布规律研究。结果显示,成功建立了DPV TaqMan荧光定量PCR检测方法,该方法最低检测限可以达到10 copies·μL-1,与番鸭细小病毒、鸭圆环病毒、鸭坦布苏病毒、鸭呼肠孤病毒、H9N2亚型禽流感病毒、鸭甲型肝炎病毒(I型和III型)和鸭衣原体均无交叉反应,批间和批内变异系数均小于2.0%。DPV-AX株感染CEF细胞后,病毒核酸拷贝数检测结果表明,4~8 h病毒增殖缓慢,12~60 h迅速上升,60 h达到最高峰,72~144 h逐渐下降,与TCID50法测定的病毒滴度相比,两种检测方法具有良好相关性,可实现拷贝数替代TCID50。DPV人工感染鸭组织脏器的病毒载量分布检测表明,肝脏中的病毒载量最高。本试验建立的检测方法为研究DPV-AX株在CEF上的增殖规律提供工具。
分类号: S858.32
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