H9亚型禽流感病毒mRNA疫苗的构建与效力评价

文献类型： 中文期刊

第一作者： 黄程

作者： 黄程;杨志远;林健;程慧敏;王米;毛惠琳;王国良;刘贵明;赵际成;刘月焕

作者机构：

关键词： H9亚型;禽流感病毒;mRNA疫苗;LNP;免疫保护

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2025 年 56 卷 004 期

页码： 1843-1853

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： H9亚型禽流感（avian influenza, AI）对养鸡业尤其肉鸡产业危害巨大，灭活疫苗不能有效阻止病毒在鸡上呼吸道感染复制，有必要研究H9亚型禽流感病毒（avian influenza virus, AIV）血凝素（hemagglutinin, HA）基因的mRNA疫苗。参考GenBank 2022年公开的HA基因序列，优化HA全长（HA）和HA胞外区（HAe）序列，连接至pUC57载体构建体外转录模板，经体外转录、加帽、纯化，采用脂质纳米颗粒（Lipid nanoparticles, LNP）包封mRNA,并转染人胚肾细胞（293T）、仓鼠肾细胞（BHK-21）和鸡胚成纤维细胞（DF-1）,Western blot检测HA表达。20只3周龄SPF鸡，随机分成4组，每组5只，分别经腿部肌肉接种0.3 mL PBS、25μg HA mRNA LNP、25μg HAe mRNA LNP和0.3 mL H9亚型AI灭活疫苗。免疫后4周采集血清，检测血凝抑制（hemagglutination inhibition, HI）抗体，每只鸡滴鼻点眼H9N2亚型AIV 0.2 mL(含106.0 EID50),攻毒后5日采集咽喉拭子和外周血单个核细胞，分别检测病毒分离情况及IFN-γ、IL-4的表达水平，观察气管组织病理学变化。Western blot结果显示两种mRNA HA蛋白均成功表达，经LNP包封后可有效在细胞内完成翻译。HA mRNA LNP和HAe mRNA LNP免疫SPF鸡后HI抗体效价（log2）平均值分别为5.6和3。H9亚型AI灭活疫苗免疫后HI抗体效价（log2）平均值为9.8,极显著高于2个mRNA LNP组（P<0.01）。非免疫对照、HA mRNA LNP、HAe mRNA LNP和H9亚型AI灭活疫苗组病毒分离结果分别为5/5、1/5、4/5和2/5。HA mRNA LNP组IFN-γ表达水平显著高于其他组（P<0.05）,HAe mRNA LNP组IL-4表达水平显著低于其他组（P<0.05）。气管组织病理学变化结果表明HA mRNA LNP和H9亚型AI灭活疫苗免疫可有效减轻H9亚型AIV对SPF鸡气管上皮细胞的损伤。构建的H9亚型AIV HA全长mRNA疫苗免疫鸡能提供有效保护，而HA胞外区mRNA疫苗不能提供有效的免疫保护。

分类号： S859.797

  • 相关文献

[1]多重反转录聚合酶链式反应检测H5、H7和H9亚型禽流感病毒的研究. 张文慧,王伟利,郑聪,刘明,钱爱东. 2009

[2]H5、H7和H9亚型禽流感病毒多重反转录聚合酶链式反应检测方法的建立. 张文慧,王伟利,郑聪,刘明,钱爱东. 2010

[3]基于马赛克HA序列的H9亚型禽流感灭活疫苗的免疫效力分析. 李丽,唐国毅,冯贺龙,薛玉涵,任助,王国康,贾妙妙,商雨,罗青平,邵华斌,温国元. 2021

[4]不同免疫抗体水平下 H9亚型AIV的排毒规律研究. 盛媛,魏秀丽,徐恩民,刘娜,吴静,艾武,宋敏训,王林,马秀丽. 2020

[5]H9亚型禽流感病毒血凝素特异性单因子血清制备. 陈晓妹,王飞,张翼,刘丽玲,田国斌,曾显营,管雪婷,程成,陈化兰,李雁冰. 2011

[6]H9亚型禽流感病毒RT-PCR检测方法的建立. 包红梅,王秀荣,陶启蒙,蔡东东,王馥梅,赵玉辉,陈化兰. 2010

[7]抗H9亚型禽流感病毒血凝素单克隆抗体的制备和鉴定. 孙林,季琰,左为亮,王秀荣,潘志明,焦新安. 2010

[8]H5、H7、H9亚型禽流感病毒三重RT-PCR检测方法的建立. 赵冬敏,吴青,赵翰飞,刘青涛,杨婧,黄欣梅,刘宇卓,韩凯凯,毕可然,李银. 2019

[9]一株鸭源H9亚型禽流感病毒的分离及鉴定. 刘宇卓,李银,张敬峰,魏雪涛,梁国民,吴继红. 2007

[10]禽流感病毒H9亚型血凝抑制试验抗原国家参考品的研制. 孙建宏,刘景利,胡井雷,张从禄,韩正博,戴志红,杨帆,徐姗姗. 2013

[11]H9亚型禽流感病毒NJ01株动物回归试验前后生物学特性比较. 刘宇卓,李银,张敬峰. 2008

[12]表达H5N1亚型高致病性禽流感病毒HA基因的DNA疫苗可保护SPF鸡抵抗同型病毒的致死性攻击. 姜永萍,姜永萍,陈化兰,陈化兰,于康震,于康震,张建林,张建林,步志高,唐秀英,田国彬. 2000

[13]重组H5N1亚型流感病毒铁蛋白纳米粒mRNA疫苗的构建、表达及鉴定. 陈璐儿,庄忻雨,张桐,孙世宇,汪伟,曾博宇,于潼,鲁会军,田明尧,金宁一. 2021

[14]H1N1亚型流感病毒mRNA候选疫苗的构建、表达及鉴定. 夏胜男,庄忻雨,田明尧,陈璐儿,狄亚心,杨松慧,许智强,于潼,朱光泽,秦爱建,金宁一. 2023

[15]呼吸道合胞病毒mRNA候选疫苗的表达、鉴定及免疫效果验证. 姜人月,庄忻雨,田明尧,唐家凤,狄亚心,杨松惠,许智强,于潼,张桐,金鑫,金宁一. 2024

[16]mRNA疫苗的应用及研究进展. 张傲,刘可欣,刘佳利,谭斌,张淑琴. 2023

[17]猴痘病毒mRNA疫苗的构建及免疫评价. 唐家凤,庄忻雨,姜人月,狄亚心,杨松惠,张桐,许智强,于潼,田明尧,金宁一. 2024

[18]猪繁殖与呼吸综合征疫苗的发展现状及mRNA疫苗前景. 周洛译,孙跃峰,侯石桐,张杰. 2023

[19]兽用mRNA疫苗的研究进展. 庞帅赛,王诗诗,刘光清,孟春春. 2024

[20]中国猪源H5N1和H9N2亚型流感病毒的分离鉴定. 李海燕,于康震,杨焕良,辛晓光,陈君彦,赵朴,毕英佐,陈化兰. 2004

作者其他论文 更多>>

微信小程序