马铃薯类病毒cDNA双体探针的研制及其在检测上的应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 吕典秋

作者： 吕典秋;邱彩玲;王绍鹏;李勇;高云飞

作者机构：

关键词： 马铃薯;马铃薯纺锤块茎类病毒;探针;双体;核酸斑点杂交

期刊名称： 园艺学报

ISSN： 0513-353X

年卷期： 2009 年 37 卷 10 期

页码： 1538-1544

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 在马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle tuber viroid,PSTVd)基因组中BamHⅠ位点处(87~92nt),设计两对含有BamHⅠ重叠区(overlop)的引物。将PCR扩增获得的全长PSTVd分别插入到pGM-T载体中。通过BamHⅠ位点,将两个PSTVd单体连接,构建了PSTVd双体载体。以此载体为模板,通过PCR标记技术,制备了高灵敏高专化的PSTVd双体cDNA地高辛标记探针。以CDP-Star为反应底物进行化学发光反应结果判读,建立了PSTVd的高效杂交检测体系。该体系可以对马铃薯薯块、叶片、芽等不同组织样品进行检测,检测灵敏度达到0.05pg。通过对67份田间采集的样品和实验室保存的资源材料进行检测,比较了cDNA双体探针核酸斑点杂交技术(nucleic acid spot hybridization,NASH)、反转录聚合酶链式反应(reverse-transcriptional polymerase chain reaction,RT-PCR)和往返-聚丙烯酰胺凝胶电泳(return-polyacrylamide gel electrophoresis,R-PAGE)检测技术的阳性样品检出率,结果显示,NASH技术阳性样品检出率为67.7%,与RT-PCR相一致,高于R-PAGE技术的阳性检测率(53.7%)。

分类号： S532

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