副猪嗜血杆菌ompP2基因的克隆、表达及间接ELISA抗体检测方法的建立
文献类型: 中文期刊
第一作者: 贾爱卿
作者: 贾爱卿;李春玲;王贵平;何永龙;袁子彦
作者机构:
关键词: 副猪嗜血杆菌;ompP2基因;克隆;表达;间接ELISA
期刊名称: 中国兽医学报
ISSN: 1005-4545
年卷期: 2011 年 09 期
页码: 1266-1269
收录情况: 北大核心 ; CSCD
摘要: 用PCR方法扩增副猪嗜血杆菌的外膜蛋白ompP2基因,序列测定结果表明扩增片段全长1 188bp。将扩增片段插入表达载体pET-32a,转化BL21进行诱导表达,SDS-PAGE电泳结果证实重组融合蛋白约为60 000,West-ern-blot结果表明重组表达蛋白具有免疫反应性。以纯化的重组蛋白ompP2作为抗原,建立副猪嗜血杆菌的抗体间接ELISA检测方法。通过试验确定最佳反应条件为抗原包被质量浓度4.75mg/L,4℃包被过夜,待检血清的稀释浓度为1∶40,阳性判断标准为D630大于0.383。特异性和重复性试验表明,建立的间接ELISA方法具有良好的特异性和敏感性,可用于副猪嗜血杆菌的检测。
分类号: S852.61
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