含MDV gB CTL表位与鸡HSP108融和蛋白基因的构建及原核表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 邱亚峰

作者： 邱亚峰;葛菲菲;曹瑞兵;周斌;马志永;陈溥言

作者机构：

关键词： CTL表位;原核表达;融合蛋白基因;热休克蛋白

期刊名称： 西北农林科技大学学报. 自然科学版

ISSN： 1671-9387

年卷期： 2009 年 37 卷 5 期

页码： 1-6

收录情况： CSCD

摘要： [目的]为新型马立克氏病(MD)疫苗的开发奠定基础.[方法]以SPF鸡肝脏中提取RNA为模板,利用RT-PCR反应扩增鸡HSP108基因;利用PCR方法扩增MDV gB CTL表位基因,并将MDV gB CTL表位基因与鸡HSP108融合在一起,构建融合蛋白基因rgBHSP108,将该融合蛋白基因克隆入原核表达载体pET-28a中,构建重组表达载体pET-gBHSP108,将该重组载体转化E.coli BL21(DE3),并用IPTG诱导融合蛋白rgBHSP108的表达,对rgBHSP108进行SDS-PAGE电泳、可溶性分析、蛋白纯化及Western-blot分析.[结果]扩增到鸡2.4 kb的HSP108基因和330 bp的MDV gB CTL表位基因;克隆的鸡HSP108基因序列与GenBank上发表的鸡输卵管HSP108(NM204289)和来源于肝脏HSP108(AF387865)核苷酸的同源性分别为99.7%和99.0%.rgBHSP108融合蛋白基因构建成功;融合蛋白rgBHSP108以包涵体的形式获得高效表达并纯化.Western-blot分析表明,针对MDV gB CTL表位的多抗可以与融合蛋白发生特异性反应.[结论]成功构建了鸡HSP108融合蛋白基因,利用原核表达系统成功表达rgBHSP108.

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