文献类型: 中文期刊
第一作者: 李向东
作者: 李向东;沈阳;邱亚峰;马志永
作者机构:
关键词: 马立克病病毒;Meq;p53;转录激活
期刊名称: 微生物与感染
ISSN: 1673-6184
年卷期: 2008 年 3 卷 01 期
页码: 21-24
摘要: 目的构建鸡马立克病病毒野生型Meq基因(Meq-wt)和p53结合区域缺失的突变型Meq基因(Meq-mut)表达质粒,研究Meq蛋白对p53转录激活功能的影响,为进一步了解其生物学功能奠定基础。方法采用聚合酶链反应(PCR)方法克隆鸡马立克病病毒Meq-wt基因,并采用突变PCR方法缺失Meq与p53结合区域,分别构建了Meq-wt和Meq-mut基因表达质粒。转染鸡胚成纤维细胞(CEF)后,用Western印迹法检测Meq蛋白的表达,利用荧光素酶报告基因系统证实Meq蛋白对p53转录激活的抑制作用。同时借助免疫荧光技术,采用荧光显微镜观察Meq蛋白与p53蛋白在细胞中的定位。结果DNA序列测序表明克隆的Meq-wt、Meq-mut基因插入位点和核苷酸序列完全正确。荧光素酶报告基因系统证实Meq蛋白对p53转录激活具有明显的抑制作用。间接免疫荧光试验证实野生型Meq蛋白主要在胞质中表达,而缺失与p53结合区域的突变型Meq在胞质/胞核中均有表达。野生型Meq蛋白与内源性p53蛋白在胞核内能够很好地重合。结论Meq蛋白对p53的转录激活具有抑制作用,可能是通过直接与p53相互结合,来抑制对p53的转录活性。
分类号: S852.65
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