武夷菌素产生菌Fosmid文库的构建及文库探针的获得

文献类型： 中文期刊

第一作者： 檀贝贝

作者： 孙蕾;张克诚;杨振娟;武哲;张俊

作者机构：

关键词： 武夷菌素;基因组;Fosmid文库;文库探针

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2011 年 0 卷 06 期

页码： 116-121

收录情况： 北大核心

摘要： 以不吸水链霉菌武夷变种CK-15为材料,提取基因组DNA,经Sau 3AⅠ部分酶切后回收35-40 kb之间的片段,连接到pCC1FOS载体上,经过包装转染涂布后构建得到了CK-15基因组的Fosmid文库,文库的滴度为8.8×10~5CFU/mL。随机挑取16个阳性克隆,经EcoRⅠ和HindⅢ双酶切电泳分析,样品插入片段平均长度大于35 kb,插入率为100%,符合构建文库的要求。根据多氧霉素、尼克霉素生物合成基因及大环内酯类聚酮合成酶基因(PKS)设计特异性引物,以基因组为模板进行PCR扩增,筛选特异性引物探针。结果用大环内酯类聚酮合成酶基因设计引物扩增出1 693 bp的片段经Blast比对其与大环内酯类抗生素生物合成基因相似性为95%以上。武夷菌素产生菌CK-15 Fosmid文库的构建及文库探针的获得,为武夷菌素生物合成基因的克隆奠定了基础。

分类号： S482.2

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