湖羊PSMB9基因克隆、序列分析及对成肌细胞增殖的影响

文献类型： 中文期刊

第一作者： 谢蓓伊庭

作者： 谢蓓伊庭;王悦;孟春花;钱勇;张俊;张建丽;王慧利;曹少先;李隐侠

作者机构：

关键词： 湖羊;PSMB9基因;克隆;组织表达谱;C2C12细胞系;细胞增殖

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2025 年 52 卷 001 期

页码： 1-12

收录情况： 北大核心

摘要： 【目的】探讨湖羊蛋白酶体亚基β9(proteasome 20S subunit beta 9,PSMB9)基因编码区、启动子区序列特征、转录调控机制及其对成肌细胞增殖的影响。【方法】采用克隆测序法获得湖羊PSMB9基因编码区序列，根据绵羊PSMB9基因组的定位确定其启动子区大小，并通过生物学软件分析PSMB9基因编码区和启动子区序列特性，采用Mega 5.0中的邻接法(Neighbor-Joining)构建基于PSMB9氨基酸序列的系统进化树；采用实时荧光定量PCR鉴定PSMB9基因在湖羊不同组织中的表达谱；利用双酶切法构建湖羊PSMB9基因过表达载体，采用CCK-8试剂盒检测细胞的增殖能力，通过实时荧光定量PCR检测PSMB9基因在C2C12细胞系中的过表达效果和增殖基因PCNA的表达水平。【结果】湖羊PSMB9基因编码区长660 bp,编码219个氨基酸残基，其核苷酸序列和氨基酸序列与哺乳动物(如人、牛、猪和小鼠)的相似性较高，PSMB9氨基酸中活性位点和β亚基相互作用位点均高度保守；系统进化树显示，湖羊与牛先聚在一起，再与猪、人和小鼠聚在一起，说明PSMB9在哺乳动物中相对保守。PSMB9基因启动子区含有1个CpG岛、2个GC-box(CCGCCC)和2个E-box(CANNTG),且存在SP1、KLF4、STAT3、YY1、CREB1等多种转录因子潜在结合位点。组织表达谱显示，PSMB9基因在湖羊各组织中广泛表达，其中在脾脏中表达量最高，肌肉次之。与对照组相比，在C2C12细胞系中过表达PSMB9基因后极显著提升了细胞的增殖能力(P<0.01),增殖标志基因PCNA表达水平极显著上调(P<0.01)。【结论】本研究成功克隆获得了湖羊PSMB9基因序列，该基因在哺乳动物中高度保守，启动子区含有重要调控元件、CpG岛和转录因子潜在结合位点。PSMB9基因在湖羊脾脏和肌肉组织中高表达，PSMB9基因过表达可促进成肌细胞的增殖。研究结果为进一步阐明PSMB9基因调控湖羊肌肉发育的分子机制提供依据。

分类号： S826

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