miR-155与CEBPB的靶向验证及繁殖性能相关基因的检测

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李军义

作者： 李军义;刘娣;马红;汪亮;霍秀鹏;郝丽

作者机构：

关键词： 繁殖性能;CEBPB基因;miR-155

期刊名称： 野生动物学报

ISSN： 2310-1490

年卷期： 2023 年 44 卷 002 期

页码： 305-312

收录情况： 北大核心

摘要： CEBPB具有调节黄体生成促进排卵的作用,对动物繁殖性能极为重要,试验旨在通过构建CEBPB的3'端非翻译区(3'UTR)双荧光素酶报告基因载体,验证Mi-croRNA-155(miR-155)调控CEBPB的分子机制.应用在线生物信息学软件预测miR-155与CEBPB基因 3'UTR的靶向结合区,PCR扩增获取民猪组织基因组的CEBPB的3'UTR,将其插入psi-Check-2载体,构建野生型(wt-3'UTR)和突变型重组表达载体(mut-3'UTR),鉴定正确后,分别与miR-155模拟物(mimics)/抑制物(inhibi-tor)/阴性对照物(NC)共转染到PK15细胞,检测荧光素酶活性及CEBPB表达情况.结果表明:成功构建了CEBPB的3'UTR野生型和突变型表达载体,双荧光素酶报告基因检测显示wt-3'UTR/miR-155 mimics组的萤火虫荧光素酶活性受到显著抑制(p<0.05);而mut-3'UTR/miR-155 inhibitor组的萤火虫荧光素酶相对活性与对照组相比变化不显著(p>0.05).实时荧光定量结果显示,miR-155 mimics组CEBPB、BMP1和PPARG表达水平显著低于miR-155 NC组(p<0.05),而miR-155 inhibitor组CEBPB表达水平高于miR-155 NC组(p<0.05).综上表明,miR-155可以靶向负调控CEBPB的表达.

分类号： Q492

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