青海血蜱cDNA表达文库的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 高金亮

作者： 高金亮;关贵全;马米玲;刘志杰;党志胜;刘爱红;李文卉;任巧云;罗建勋;殷宏

作者机构：

关键词： 青海血蜱;cDNA表达文库;构建

期刊名称： 畜牧兽医学报

ISSN： 0366-6964

年卷期： 2005 年 36 卷 11 期

页码：

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 在无RNA酶污染的环境下摘取半饱血青海血蜱唾液腺、马氏管和卵巢等器官,从中提取RNA,进而纯化mRNA,采用oligo(dT)引物合成双链cDNA,并在其两端加EcoRⅠ/HindⅢ定向接头。将所产生的cDNA分子定向克隆到具有EcoRⅠ/HindⅢ黏性末端的λSCREEN载体的两臂之间。用PhageMaker extract对以上连接产物进行体外包装以形成完整的噬菌体,并用之转染大肠杆菌ER1647,从而构建成青海血蜱的cDNA表达文库。经测定,所构建青海血蜱cDNA文库的库容量约为2×106PFU/mL,重组率为100%,扩增后文库的滴度为8×109PFU/mL。通过对该文库的免疫学筛选,获得一个编码青海血蜱肌球蛋白碱性轻链的全长cDNA序列。所有结果显示,青海血蜱cDNA表达文库已成功构建。

分类号： S852.746

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