仙台病毒RT-LAMP可视化检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 周洁

作者： 周洁;赵丽娟;陶凌云;倪丽菊;高诚;陈洪岩

作者机构：

关键词： 仙台病毒;RT-LAMP;实时监控;快速检测

期刊名称： 中国实验动物学报

ISSN： 1005-4847

年卷期： 2016 年 24 卷 03 期

页码： 293-298

收录情况： CSCD

摘要： 目的建立一种快捷、灵敏的检测方法,即反转录-环介导等温扩增方(RT-LAMP)用于仙台病毒(SeV)的检测。方法根据Gen Bank公布的SeV序列(DQ219803.1),在其保守区域设计了六套LAMP引物,利用LAMP Real-Time Turbidimeter LA-320C仪监测反应进程并筛选最佳引物、反应条件,建立对SeV核酸进行特异性扩增的RT-LAMP检测方法,并可通过加入目测荧光检测试剂肉眼判断结果。对所建立的方法进行了敏感性、特异性评估并对92份样品进行了检测。结果该方法在63℃恒温下作用60 min,SeV RNA获得了高效率的特异性扩增,与其余常见小鼠病毒无交叉反应;最低检出量为2.1TCID_(50) SeV,比RT-PCR方法高102倍;肉眼判断结果与RealTime Turbidimeter LA-320仪监测结果一致;通过对92份样品的RT-LAMP,RT-PCR和间接ELISA方法的检测比对,三者符合率为100%。结论建立的SV RT-LAMP检测方法具有快速、特异、灵敏,操作简单的特点,具有良好的应用前景。

分类号： S852.65

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