不同探针大小、标记物及反应底物对马铃薯类病毒杂交检测的影响

文献类型： 中文期刊

第一作者： 吕典秋

作者： 吕典秋;刘尚武;邱彩玲;李勇;宿飞飞;王绍鹏;吕文河

作者机构：

关键词： 马铃薯纺锤块茎类病毒;探针;核酸斑点杂交;标记

期刊名称： 植物病理学报

ISSN： 0412-0914

年卷期： 2011 年 41 卷 02 期

页码： 154-160

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 灵敏可靠地检测马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle tuber viroid,PSTVd)对脱毒种薯的生产具有重要意义。本研究探索了影响核酸杂交检测技术的关键因素。通过基因克隆技术构建了插有PSTVd全长单体、双体及片段的载体。分别以地高辛和同位素为标记物,利用PCR和转录标记技术制备cDNA和RNA探针。比较探针大小、标记物、标记方法、反应底物等对检测灵敏度的影响。结果显示,以地高辛为标记物,利用PCR标记制备的PSTVd双体cDNA探针,在以CDP-Star为底物,通过在柯达X-OMAT BT胶片进行化学发光反应来分析结果的检测灵敏度最高,可以检测到0.05 pg总RNA中的PSTVd,是国外报道检测灵敏度的500倍。利用核酸斑点杂交技术检测PSTVd具有灵敏度高,一次可检测样品数量多等特点,对于大规模PSTVd检测更加方便可行。

分类号： S435.32

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