土霉素完全抗原的制备及ELISA检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 曹金博

作者： 曹金博;胡骁飞;王耀;李燕虹;曹夕丹;邢云瑞;孙亚宁;邓瑞广;张改平

作者机构：

关键词： 土霉素;完全抗原;多抗血清;ELISA

期刊名称： 食品与机械

ISSN： 1003-5788

年卷期： 2019 年 35 卷 009 期

页码： 77-83

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为制备土霉素(Oxytetracycline,OTC)完全抗原,获得免疫学特性良好的土霉素鼠源多抗血清并建立OTC免疫学检测方法,采用重氮化法在OTC分子上引入羧基,进而利用改进碳二亚胺法将其与载体蛋白偶联制备完全抗原,通过红外扫描、紫外扫描和凝胶电泳鉴定其偶联效果,然后将完全抗原免疫BLAB/c小鼠获得多抗血清(pAb)并对其免疫学特性进行鉴定,通过优化条件建立OTC间接竞争ELISA检测方法.结果表明,偶联效果良好,免疫的4只小鼠多抗血清效价均达到1︰12800;4只小鼠多抗血清均有抑制效果,其中2号小鼠产生的多抗血清效果最佳,基于该多抗血清建立的OTC间接竞争ELISA检测方法半数抑制浓度(IC 50)为32.92 ng/mL,检测限(LOD)为1.3 ng/mL,牛奶样品中添加回收率在84.70%~87.45%,与金霉素、四环素的交叉反应率分别为5.27%,4.10%,与其他竞争物交叉反应率<0.4%.该试验成功合成了OTC完全抗原,获得了免疫学特性良好的OTC多抗血清,并建立了OTC免疫学检测方法.

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