绵羊AMH基因的克隆、序列分析与原核表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 蒋香菊

作者： 蒋香菊;吴阳升;林嘉鹏;汪立芹;张利;古丽米热·阿不都热依木;杨楠;刘莉;黄俊成

作者机构：

关键词： 绵羊;AMH基因;序列分析;原核表达

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2013 年 29 卷 06 期

页码： 1386-1392

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 旨在克隆绵羊抗苗勒管激素基因(oAMH)的全长编码区序列,并对其序列进行分析。以绵羊的卵泡颗粒细胞全RNA逆转录得到的cDNA为模板,参照牛的AMH cDNA序列设计兼并引物,对oAMH基因的全长编码区进行T载体克隆并测序,并对其进行生物信息学分析。根据预测的编码区氨基末端260氨基酸对应的序列设计表达引物,构建原核表达载体pET15b-oamh260,转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。序列分析结果表明,获得的绵羊AMH基因序列全长1 797 bp(GenBank登录号:KC986978),完整开放阅读框为1 728 bp,共编码575个氨基酸,氨基末端24个氨基酸为信号肽序列,羧基末端区域TGFβ家族保守区,全序列与牛AMH的同源性为95.80%。SDS-PAGE结果显示,IPTG诱导表达的融合蛋白大小为30 000,与预期蛋白质大小一致。Western blot检测结果显示,该蛋白质为His融合蛋白。以上结果表明该试验成功克隆了绵羊AMH基因的完整编码区序列,构建了原核表达载体,在大肠杆菌中成功表达出目的融合蛋白,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。

分类号： S826

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