逆转录病毒转染胚盘细胞制备嵌合体鸡胚的研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张秋婷

作者： 张秋婷;苗向阳;安铁洙

作者机构：

关键词： 逆转录病毒;增强型绿色荧光蛋白;胚盘细胞;嵌合体;鸡

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2010 年 43 卷 15 期

页码： 3266-3270

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】通过重组逆转录病毒体内感染源于第X期胚盘细胞的方法获得嵌合体鸡。【方法】将扩增的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的开放阅读框插入逆转录病毒表达载体pour-pBabe中获得重组逆转录表达载体;采用磷酸钙转染法将其与包装载体pVSVG共转入29310A1包装细胞中进行病毒包装,得到病毒原液经超速离心浓缩200倍后注入种蛋(第X期)胚盘下腔,孵化种蛋。提取孵化5.5天的鸡胚基因组DNA,进行PCR检测和Southern杂交检测。【结果】构建含EGFP完整开放阅读框的逆转录病毒表达载体pour-pBabe-EGFP,提取孵化5.5d鸡胚基因组DNA,经PCR、Southern杂交检测,嵌合体阳性率分别为75%和66.7%。【结论】通过用重组逆转录病毒体内感染鸡胚盘细胞的方法可获得嵌合体鸡。

分类号： S814.8

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