非洲猪瘟病毒MGF505-5R基因分子特征及蛋白表达载体构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 沈兆基

作者： 沈兆基;谢春嫡;沙嘎那日·吉日木图;郭肖蓉;周荣;李奎

作者机构：

关键词： 猪;非洲猪瘟病毒;蛋白结构;真核表达载体

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2023 年 005 期

页码： 1100-1110

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 非洲猪瘟（African swine fever, ASF）是一种对猪（Sus scrofa）具有毁灭性的疾病，通常引发出血热，对养猪业危害巨大。多基因家族（multigene families, MGF） 505-5R位于非洲猪瘟病毒（African swine fever virus, ASFV）基因组右侧可变区域（the right variable region, RVR），能够影响病毒的毒力。本研究旨在分析MGF505-5R基因和蛋白的分子特征，构建MGF505-5R基因真核表达载体。根据ASFV参考基因组（GenBank No. MK128995.1）提取MGF505-5R基因序列进行生物信息学分析，并合成MGF505-5R基因片段。通过同源重组的方式将MGF505-5R基因连接至pRK5M-C-2×Strep载体。经PCR和测序鉴定后，将重组质粒pRK5M-C-2×Strep-MGF505-5R转染至猪小肠上皮细胞系（porcine intestinal columnar epithelial cells, IPEC-J2）中，通过免疫荧光和Western blot检测MGF505-5R的基因表达效果。通过qPCR检测过表达p RK5M-C-2×Strep-MGF505-5R的IPEC-J2细胞中外切体（exosome） 8个亚基、Mtr4外切体RNA解旋酶（Mtr4 exosome RNA helicase, MTREX）、末端核苷酸转移酶4A （terminal nucleotidyltransferase 4A,TENT4A）、锌指DHHC型棕榈酰转移酶16 （zinc finger DHHC-type palmitoyltransferase 16, ZDHHC16）基因的表达。生物信息学分析结果表明，MGF505-5R基因在系统发育树中分为3个分支，MGF505-5R蛋白在20、105和485位氨基酸存在正向选择。MGF505-5R蛋白的二级结构与三级结构相符，正选择位点均位于无规则卷曲上。PCR结果显示MGF505-5R基因片段成功连接至pRK5M-C-2×Strep载体中。免疫荧光和Western blot检测结果显示，MGF505-5R蛋白能够在猪IPEC-J2细胞中表达。qPCR结果显示，过表达pRK5M-C-2×Strep-MGF505-5R的IPEC-J2细胞中外切体组分（exosome component, EXOSC） 1、EXOSC2、EXOSC3、EXOSC4、EXOSC5、EXOSC7、EXOSC8、EXOSC10、TENT4A和ZDHHC16的表达量极显著降低（P＜0.01）;MTREX的表达量无显著变化。本研究对MGF505-5R分子特征的分析，为该基因的进化研究提供基础；构建MGF505-5R在猪IPEC-J2细胞的表达载体，为ASFV与宿主之间的蛋白质相互作用研究提供有效的工具和实验素材。

分类号： S852.651

  • 相关文献

[1]猪TLR5基因定点突变表达载体构建. 李海涛,陈月婵,牛艳春,李朋,刘娣,杨秀芹. 2012

[2]猪miRNA-101真核表达载体的构建及定点突变. 张姣,邵思宇,李利族,汪亮,刘娣,杨秀芹. 2015

[3]猪Sar1b基因真核表达载体构建及鉴定. 王学敏,李碧侠,任守文. 2007

[4]猪APOBEC3F基因真核表达载体的构建及其在MARC145细胞中的表达定位. 孟春花,王春玲,李静心,李隐侠,朱前明,曹少先. 2015

[5]猪Sarlb基因真核表达载体构建及鉴定. 王学敏,李碧侠,任守文. 2007

[6]柞蚕腺苷酸转移酶基因的克隆与序列分析. 李玉萍,王欢,武松,夏润玺,刘彦群,秦利,李喜升,姜德富. 2009

[7]剂量率对辐照牛血清蛋白生化特性和结构的影响. 耿胜荣,鉏晓艳,李新,白婵,李海蓝,叶丽秀,廖涛. 2017

[8]垂穗披碱草MADS-box基因WM8克隆及分析. 张妙青,张吉宇,刘志鹏,王彦荣,张磊. 2012

[9]秘鲁鱿鱼肌原纤维蛋白凝胶的构效关系研究. 林伟伟,励建荣,潘伟春,傅玉颖,李昂. 2017

[10]昆虫嗅觉相关可溶性蛋白的研究进展. 张玉,杨斌,王桂荣. 2019

[11]中国部分地区对虾白斑综合征病毒胶原蛋白基因缺失变异分析. 秦梦雪,刘庆慧,万晓媛,黄捷. 2017

[12]山羊紧密连接相关蛋白ZO-1序列的生物信息学分析. 王梦雅,赵学亮,徐明,李洋,宋利文,高峰,胡红莲,高民. 2018

[13]环糊精水解酶cds1-3底物通道氨基酸的定点突变研究. 汤宏赤,莫莉,闭海,林丽华,郭媛,庞浩. 2019

[14]改性处理对猪肌原纤维蛋白结构及凝胶特性的影响. 姜国川,王丽岩,刘亚春,孙洪蕊,张佳霖,刘学军,闫晓慧. 2019

[15]生长素反应因子ZmARF1的表达分析及互作网络探究. 孙建军,郭玉玺,王瑞,王德新,郭子宁,帖奇,鲁晓民. 2020

[16]小菜蛾腺苷受体基因PxAdoR克隆及杀虫靶标作用. 方鸣,柴一秋,陈官菊,章金明,吕要斌,黄勃. 2016

[17]桔黄赛多孢霉外泌弹性蛋白酶的生化特性. 彭元怀,葛歆,叶剑芝,金蓓,韩志萍. 2023

[18]牛GDF8基因编码蛋白结构和功能预测. 赵拴平,金海,徐磊,贾玉堂. 2023

[19]水貂AANAT基因克隆及生物信息学分析. 范冰峰,李文,刘理想,赵向远,邵静,林乐丰,孙慧敏,张旭林,许保增. 2023

[20]奶牛精子变形期间Pld6基因表达及蛋白序列分析. 李小俊,李欣,陈晓丽,赵毅强,路永强,王栋. 2018

作者其他论文 更多>>

微信小程序