大螟中肠氨肽酶N基因的克隆及表达谱分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王兴云

作者： 马文静;韩兰芝;侯茂林

作者机构：

关键词： 大螟;Bt受体蛋白;氨肽酶N;基因克隆;表达谱

期刊名称： 昆虫学报

ISSN： 0454-6296

年卷期： 2012 年 55 卷 09 期

页码： 1022-1030

收录情况： 北大核心

摘要： 昆虫中肠氨肽酶N是Bt毒素的重要受体之一,与Bt毒素的杀虫机制及昆虫Bt抗性的产生密切相关。本研究通过简并引物PCR结合RACE技术克隆并获得大螟Sesamia inferensBt受体蛋白——氨肽酶N(aminopeptidase N,APN)基因的cDNA序列全长,经NCBI同源比对分析,认为该基因为APN3基因,并将其命名为SiAPN3(GenBank登录号为HQ636624)。序列分析表明,该基因的cDNA序列全长为3411bp,开放阅读框为3018bp,编码1006个氨基酸;预测蛋白质分子量为114kD,等电点为4.95;其推导的氨基酸序列中具有鳞翅目昆虫氨肽酶N典型的结构特征,即含有1个N-和12个O-连接的糖基化位点,N-末端具有18个氨基酸的剪切信号肽,谷氨酸锌化氨肽酶保守结构GAMEN,锌结合位点HEXXHX18E,C-末端具有22个氨基酸的糖基磷脂酰肌醇(GPI)锚信号肽。采用实时定量PCR研究了SiAPN3在大螟4龄幼虫肠道不同部位和幼虫不同龄期的转录表达谱。结果表明,该基因在幼虫中肠中的表达量最高,其次为后肠,前肠中表达量最低,且中肠和后肠中的表达量显著高于前肠(P<0.05);SiAPN3在3龄幼虫中的表达量最高,1龄幼虫中最低,虽然3、4日龄之间的表达量没有显著差异,但二者均显著高于其他日龄,1,2和5日龄之间不存在显著差异(P>0.05)。该研究为阐明APN基因的功能及大螟对Bt抗性产生的分子机制奠定了基础。

分类号： S433.4

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