Bacillius naganoensis普鲁兰酶基因的分子改造及酶学性质研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 秦艳

作者： 谢能中;曹薇;王青艳;米慧芝

作者机构：

关键词： 普鲁兰酶;长野芽孢杆菌;酶分子改造;酶学性质

期刊名称： 生物技术

ISSN： 1004-311X

年卷期： 2014 年 02 期

页码： 53-57

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的:通过缺失原酶上氨基酸残基,提高普鲁兰酶的酶活,并对其突变体重组酶进行酶学特性研究。方法:以Bacillius naganoensis基因组DNA为模板,PCR扩增大小为2 781 bp的普鲁兰酶编码基因,并通过PCR方法缺失原酶上的前78个氨基酸残基,获得突变体PulA234,将编码基因酶切连接到表达载体pET-22b(+),转化Escherichia coli BL21(DE3)。IPTG诱导表达后对表达产物进行SDS-PAGE和酶学特性研究。结果:突变体发酵液的酶活是原酶的19倍,SDS-PAGE电泳结果显示有明显特异性条带,分子质量约为100 kDa。该突变酶的最适反应温度为60℃,最适pH为4.75,在pH 3.8~6.6范围内活性稳定,Cu2+、Ca2+对酶活有激活作用。结论:经改造的重组酶酶活力有所提高,具有良好的pH和酸稳定性,为普鲁兰酶酶制剂工业化生产及应用奠定基础。

分类号： Q55

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