猪圆环病毒2型双拷贝感染性DNA的构建及体外拯救

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李俊

作者： 李俊;时建立;于周;徐绍建;丁鹏;程凯慧;王金宝

作者机构：

关键词： 猪圆环病毒2型;单拷贝;双拷贝;自身环化;感染性克隆;体外拯救

期刊名称： 生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2009 年 25 卷 11 期

页码： 1633-1638

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 感染性分子克隆是研究病毒复制和致病机制的有力工具。本研究应用PCR诱变技术解决了外源片段易于自连的难题,成功将2个PCV2SD1株全基因组(DQ346683)头尾相接插入到真核生物表达载体pSK的多克隆位点中,构建重组质粒pSK-2PCV2;另外课题组成功构建含单个PCV2全基因组的pSK-PCV2和自身环化质粒ds-PCV2。将所得3种质粒分别转染无PCV污染的PK-15细胞系,经10次连续传代后,间接免疫荧光试验检测显示三者均在细胞核中聚集大量的病毒抗原;经RT-PCR检测都有PCV2特异性基因转录;透射电镜下可观察到直径约为17～20nm的典型PCV2病毒粒子;经测序鉴定所拯救出的病毒与亲本病毒核苷酸同源性为100%。拯救出的PCV2与亲本病毒具有相同的病毒学及分子生物学特性。本研究应用PCR诱变技术成功构建PCV2双拷贝感染性克隆,并经体外拯救证实其具有感染性,为进行PCV2分子特性及致病机理研究打下了基础。

分类号： S852.65

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