猪δ冠状病毒抗体间接ELISA检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 尚再卓

作者： 尚再卓;于瑞明;张莉萍;王永录;潘丽;杜晓华;刘霞;刘新生

作者机构：

关键词： 猪δ冠状病毒;S1-CTD蛋白;间接ELISA;IgA抗体

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2022 年 012 期

页码：

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 以大肠杆菌表达系统表达的猪δ冠状病毒（porcine deltacoronavirus, PDCoV）截短抗原S1-CTD蛋白作为包被抗原，建立能够检测血清特异性IgA抗体的间接ELISA方法。以本实验室分离保存的PDCoV流行株CH/XJYN/2016（MN064712）的S基因为模板设计合成特异性引物，通过RT-PCR扩增出S基因抗原表位区S1-CTD（877～1 299 bp）,构建原核表达载体pET24a-S1-CTD,经IPTG诱导表达重组蛋白S1-CTD,纯化后作为包被抗原建立了检测PDCoV特异性IgA抗体的间接ELISA方法。结果显示，抗原最佳包被质量浓度为8 mg/L,血清和酶标二抗最佳稀释比例为1∶10和1∶5 000;S/P≥0.489判定为阳性，S/P＜0.489判定为阴性。该方法与猪流行性腹泻病毒、猪嵴病病毒、口蹄疫病毒及猪瘟病毒的标准阳性血清均无交叉反应，特异性良好；批内和批间变异系数均小于10%,具有较好的重复性。间接ELISA检查方法的建立为PDCoV的血清学调查及免疫效果评价提供了有效的检测手段，为进一步开发临床检测试剂盒奠定基础。

分类号： S852.651

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