口疮病毒VIR蛋白多克隆抗体的制备及VIR蛋白的亚细胞定位观察

文献类型： 中文期刊

第一作者： 成伟伟

作者： 成伟伟;刘永杰;孔汉金;尚佑军;刘湘涛;刘磊;张克山

作者机构：

关键词： 口疮病毒;VIR蛋白;抗体;亚细胞定位

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2014 年 11 期

页码： 1160-1165

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为研究口疮病毒VIR蛋白的生物学特性,构建了含有VIR基因的重组表达质粒pET-VIR和含有绿色荧光蛋白融合真核重组质粒pEGFP-VIR;诱导表达和纯化VIR蛋白,并用纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,利用间接ELISA测定抗体效价,用Western-blot鉴定抗体的反应原性。利用脂质体介导法将pEGFP-VIR质粒转染绵羊睾丸细胞,4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)进行细胞核染色后激光扫描共聚焦显微镜观察VIR在细胞内的表达和亚细胞定位。结果显示,表达和纯化了含有GST标签的GSTVIR蛋白,主要以可溶性形式存在,其分子质量约27ku,制备的多克隆抗体效价达1∶218;Western-blot分析结果显示,此多克隆抗体有较好的特异性反应;VIR蛋白主要定位于细胞核内。本试验结果为VIR生物学功能的深入研究奠定了基础。

分类号： S852.65

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