荧光假单胞菌G2-EPSP合酶的拆分和intein介导的活性恢复

文献类型： 中文期刊

第一作者： 顿宝庆

作者： 顿宝庆;陆伟;张维;平淑珍;王旭静;陈明;徐玉泉;金丹;王劲;赵仲麟;梁爱敏;侯松娜;Ming-Qun Xu;林敏

作者机构：

关键词： 基因拆分;内含肽(intein);蛋白重建;转基因

期刊名称： 科学通报

ISSN： 0023-074X

年卷期： 2006 年 51 卷 12 期

页码： 1479-1481

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用GPS-LS接点扫描系统,在荧光假单胞菌G2的5-磷酸烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸合酶编码基因aroA中随机插入15 bp(即编码5个氨基酸短肽)的外源片段,建立含一系列不同插入位点的aroA突变体库．利用内源aroA基因缺失的大肠杆菌突变株ER2799对突变体库进行功能互补筛选,测序后确定了12个可以忍受5个氨基酸插入的位点,其中位点F295／T296经Ssp DnaE内含肽(intein)介导的蛋白互补技术鉴定为可拆分和蛋白重建的位点．从位点F295／T296将G2-EPSPS基因一分而二,N-端和C-端片段分别连接在携带Ssp DnaE内含子元件的原核表达双质粒上,获得共转化质粒pMEPSN295IN和pKEPSc296Ic．将质粒pMEPSN295IN和pKEPSc296Ic分别或共转化内源aroA基因缺失的大肠杆菌突变株ER2799中,携带共转化质粒的重组子能够在M9限制性培养基生长,而携带单一质粒的不能生长,表明从位点F295／T296拆分的aroA基因在内含肽介导下实现了蛋白重建,在突变株ER2799中恢复了5-磷酸烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸合酶活性,酶活水平达到野生型的62．92％,为4．48 U/mg．

分类号： Q78

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