柑橘黄龙病可视化LAMP检测技术的建立及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王贤达

作者： 王贤达;林雄杰;胡菡青;王宗华;范国成

作者机构：

关键词： 柑橘黄龙病菌;钙黄绿素;环介导等温扩增(LAMP);可视化

期刊名称： 热带作物学报

ISSN： 1000-2561

年卷期： 2014 年 35 卷 05 期

页码： 101-107

收录情况： CSCD

摘要： 建立柑橘黄龙病(HLB)可视化环介导等温扩增(LAMP)检测方法,为HLB的快速检测提供有力的技术支持。根据LAMP技术原理,针对柑橘黄龙病菌16S rDNA靶序列的6个位点设计4条特异性引物,通过对反应体系和反应条件的优化,并在反应前的体系中加入1∶10的钙黄绿素(calcein)和氯化锰(MnCl2)混合液作为荧光显色剂,建立可视化LAMP检测技术,同时对该技术的特异性、灵敏度和样品检测进行了测试。该检测方法具有很高的特异性,反应体系中除了HLB具有特异性的扩增,产生黄绿色荧光扩增产物,其他供试菌株均无特异扩增。对柑橘黄龙病菌总DNA的检测限为1.51×10-3 ng/μL,而对含有目的基因的CG-pMD18-T质粒DNA的检测限为2.12×10-6 ng/μL,与定量PCR灵敏度相当,而比常规PCR灵敏度高1 000倍。利用可视化LAMP技术和定量PCR对来自漳州、南平、福州等地的样品进行检测,结果 2种技术的检出率均为76.7%,符合率达到100%。

分类号： S436.66

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