高比活木聚糖酶XYN-W及其突变体在酵母中的高效表达

文献类型： 中文期刊

第一作者： 罗建杰

作者： 罗建杰;王亚茹;袁铁铮;柏映国;黄火清;罗会颖;姚斌;范云六

作者机构：

关键词： 木聚糖酶;毕赤酵母;XYN-W;高效表达;比活性改良

期刊名称： 中国农业科技导报

ISSN： 1008-0864

年卷期： 2010 年 12 卷 05 期

页码： 86-91

摘要： 将来源于瘤胃真菌Neocallimastix frontalis的高比活木聚糖酶基因xyn-w整合到毕赤酵母表达载体pPIC9上,通过电击转化得到重组转化子。SDS-PAGE分析和表达产物的研究表明,木聚糖酶基因xyn-w得到了高效分泌表达,在5 L发酵罐中木聚糖酶蛋白表达量达到1 mg/mL,酶活性达到13 000 IU以上。XYN-W的C端57个氨基酸序列为连接序列和锚定区域,利用PCR方法将此段序列去除,得到截短的木聚糖酶序列xyn-m。用相同方法构建高效表达XYN-M蛋白的毕赤酵母工程菌株,表达产物经纯化后进行酶学性质测定,结果表明,其比活为19 856.6 IU/mg,Kcat值为4 433.8 s-1,与纯化的XYN-W蛋白(比活性13 795.3 IU/mg、Kcat值2 717.1 s-1)相比,分别提高了43.9%和63.2%。

分类号： Q786

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