口蹄疫病毒非结构蛋白3AB双抗体夹心ELISA方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 付元芳

作者： 付元芳;何伟;孙普;杨林;包慧芳;曹轶梅;白兴文;李平花;李冬;陈应理;刘磊;卢曾军;刘在新

作者机构：

关键词： 口蹄疫;非结构蛋白;定量ELISA;疫苗抗原纯净度

期刊名称： 生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2020 年 36 卷 011 期

页码： 2357-2366

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 抗原纯净度是口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)灭活疫苗质量检验的一项重要内容,一般采用疫苗2-3次免疫动物后,检测非结构蛋白(Non-structural protein,NSP)抗体是否阳转,判断疫苗抗原的纯净度.文中旨在建立定量检测FMD灭活疫苗抗原中NSP 3AB含量的ELISA方法,为疫苗质量控制提供参考方法.利用口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV) NSP 3A单克隆抗体和辣根过氧化物酶(Horseradish peroxidase,HRP)标记的3B单克隆抗体,建立定量检测NSP 3AB含量的双抗体夹心ELISA检测方法.采用原核表达并纯化的3AB蛋白作为标准品,标准品系列稀释,绘制标准曲线,以标准品与未加抗原的阴性对照吸光值(∞)的比值大于2.0的标准品最低浓度为最低检测限.标准品浓度介于4.7-600.0 ng/mL之间时,测得的OD值与浓度呈线性相关,回归曲线呈直线,相关系数R2=0.99,确定最低检测限为4.7 ng/mL.检测12份未纯化灭活抗原中3AB蛋白含量介于9.3-200.0 ng/mL之间;而纯化后的病毒抗原中3AB蛋白残留量低于最低检测限;33份来自不同厂家的成品疫苗抗原中9份疫苗抗原3AB蛋白含量在9.0-74.0 ng/mL之间,其余24份疫苗抗原中3AB蛋白残留量低于最低检测限.检测3AB蛋白含量的双抗体夹心ELISA方法能够特异、敏感地检测疫苗抗原中的3AB蛋白含量,为疫苗质量控制与纯净度检验提供了一种可供选择的检测方法.

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