马铃薯Y病毒小鼠中和抗体轻链基因的克隆及序列分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘德虎

作者： 刘德虎;郭军;陈三风;梁华;李刚强

作者机构：

关键词： 马铃薯Y病毒，单克隆抗体，k轻链（kappa），基因克隆，DNA序列分析

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 10061304

年卷期： 1995 年 02 期

页码：

摘要： 从大量繁殖的Ｄ７３杂交瘤细胞中，提取制备其基因组ｍＲＮＡ，并以此为模版，经反转录途径获得基因组ｃＤＮＡ，随后将其插入到λｇｔｌｌ中，构建了马铃薯Ｙ病毒小鼠单克隆抗体ｃＤＮＡ基因文库。通过免疫原位杂交，从该基因文库中筛选出含有抗体轻链基因的阳性克隆，进一步将其插入到ｐＧＥＭ－７Ｚｆ（＋）质粒中，经酶谱和ＤＮＡ序列分析确定，完整的轻链基因被获得。该基因含有９５６个核苷酸碱基［不包括Ｐｏｌｙ（Ａ）尾巴］，其中包括５’一端非编码区３１个核苷酸碱基，编码轻链信号肽的５７个核苷酸碱基，编码成熟蛋白的６５７个核苷酸碱基和３’一端非编码区的２１１个核苷酸碱基。与已知的其它ｋ轻链（ｋａｐｐａ）基因（ＭＲＫ１６）相比，核苷酸序列同源性为９８．７％，由核苷酸序列所推导出的氨基酸的序列同源性为９７．０％。该同源性在不同功能区域之间存在着差异，其中在保守区（ＣＬ），氨基酸的序列同源性为１００％，而在可变区（ＶＬ），同源性为９３．７％，其变异主要发生在三个不同的区域，即所谓的抗原识别位点（ＣＤＲ）。该蛋白被认为对马铃薯Ｙ病毒是特异性的，因为Ｄ７３杂交瘤细胞只能够表达一种轻链蛋白。

分类号： Q78

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