T7 RNA聚合酶表达系统的真核化及其偶联表达系统的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 郑海学

作者： 郑海学;靳野;尹双辉;郭慧琛;尚佑军;白兴文;刘湘涛;谢庆阁

作者机构：

关键词： 口蹄疫病毒;IERS;T7RNA聚合酶表达系统;偶联表达系统

期刊名称： 生物工程学报

ISSN： 1000-3061

年卷期： 2007 年 23 卷 05 期

页码： 188-193

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了使T7RNA聚合酶(T7RNAP)表达系统真核化,首先,利用两种方法建立能够表达T7RNAP的真核细胞:(1)共转染表达T7RNAP的真核表达重组质粒于靶细胞;(2)利用稳定表达T7RNAP的BHK-21细胞系。然后,将FMDV内部核糖体进入位点(IRES)序列和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因定向克隆进原核载体pET-40a-c(+)的T7启动子下游,得到的重组质粒pIERS-EGFP-E。用该质粒分别转染上述两种细胞,在紫外显微镜下都能够观察到绿色荧光,表明真核化的T7RNAP偶联表达系统建立。并利用流式细胞仪对偶联表达水平进行了分析。这为利用该系统真核高效表达外源蛋白奠定了坚实的基础。用实验证明了FMDV5′端含有IERS具有介导非帽依赖性的翻译的功能,为以IERS为基础的双顺反子表达系统的建立及深入研究IERS与相关蛋白的功能奠定了基础。T7RNAP偶联表达体系是一种良好的外源基因表达体系。

分类号： Q78

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