吕氏泰勒虫cDNA表达文库的构建及其抗原基因的免疫筛选

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李有全

作者： 李有全;罗建勋;高金亮;关贵全;马米玲;刘志杰;刘军龙;刘爱红;任巧云;党志胜;鲁炳义;刘光远;白启;殷宏

作者机构：

关键词： 吕氏泰勒虫;cDNA表达文库;构建;免疫筛选

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2009 年 42 卷 01 期

页码： 331-339

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】构建吕氏泰勒虫裂殖子cDNA表达文库,并从中筛选抗原候选基因。【方法】从吕氏泰勒虫裂殖子直接提取和纯化mRNA,采用oligo(dT)引物合成双链cDNA,并在其两端加EcoRⅠ/HindⅢ定向接头。将所产生的cDNA分子定向克隆到具有EcoRⅠ/HindⅢ粘性末端的λSCREEN载体的两臂之间。用PhageMaker extract对连接产物进行体外包装以形成完整的噬菌体,并用之转染大肠杆菌ER1647,从而构建成吕氏泰勒虫的cDNA表达文库。用吕氏泰勒虫阳性血清和兔抗绵羊IgG-AP筛选得到阳性克隆,经测序和Blast软件分析并获得新基因。【结果】成功构建吕氏泰勒虫裂殖子cDNA表达文库,其初级库容量约为1.0×106PFU,扩增文库的滴度为8.2×108PFU·ml-1,文库重组率为100%;通过免疫学筛选、测序和Blast软件分析,共获得30个新基因,其中15个基因已登录GenBank/NCBI。【结论】为研究泰勒虫疫苗、新型医药和诊断抗原,以及发展可持续性防制羊泰勒虫病提供基本材料。

分类号： S852.7

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