口蹄疫病毒结构蛋白VP0抑制I型干扰素信号通路的激活

文献类型： 中文期刊

第一作者： 牟宏芳

作者： 牟宏芳;马旭升;罗志宽;张坚;郑海学

作者机构：

关键词： 口蹄疫病毒;VP0蛋白;I型干扰素;IRF3

期刊名称： 微生物学报

ISSN： 0001-6209

年卷期： 2017 年

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收录情况： CSCD

摘要： 【目的】研究口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP0对I型干扰素信号通路的影响。【方法】通过反转录PCR构建VP0真核表达载体,利用western blot验证VP0蛋白转染HEK-293T细胞后的表达情况;Real-time PCR检测VP0蛋白对FMDV在BHK细胞上复制的影响,检测VP0蛋白对Se V诱导的干扰素信号通路分子RIG-I,IRF3,IFN-β及下游刺激基因ISG15,ISG20表达的影响;双荧光素酶报告基因检测系统检测VP0蛋白对Se V诱导的IFN-β和NF-κB启动子激活以及对RIG-I样受体(RIG-I-like receptors,RLRs)信号通路分子激活IFN启动子的影响;免疫共沉淀检测VP0蛋白与RLRs信号通路中关键分子的相互作用。【结果】成功构建了p CAGGs-VP0真核表达载体,可以在HEK-293T细胞中表达;FMDV感染后的4-6h,VP0蛋白显著促进FMDV在BHK细胞上的复制(P<0.01或P<0.05);VP0蛋白明显抑制干扰素下游刺激基因的表达(P<0.01或P<0.05)。在双荧光素酶报告基因检测实验中,VP0蛋白抑制Se V诱导IFN-β和NF-κB的活化具有剂量依赖性(P<0.01),并对RIG-I、MDA5、VISA、TBK1、IRF3介导的IFN-β产生具有抑制作用,但是对IRF7没有明显的影响。免疫共沉淀显示VP0蛋白可与IRF3发生相互作用。【结论】证实VP0蛋白可以通过与IRF3相互作用来抑制I型干扰素信号通路的激活。

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