表达牛冠状病毒S1基因的重组人腺病毒的构建及鉴定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 周国辉

作者： 周国辉;于力;魏萍

作者机构：

关键词： 牛冠状病毒;S1基因;重组腺病毒

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2010 年 32 卷 11 期

页码： 834-838

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为构建表达牛冠状病毒(BCV)S1基因的重组人腺病毒疫苗,本实验通过人工合成密码子优化的截短BCV S1的基因片段(55 bp～1 650 bp)。将其克隆到重组腺病毒穿梭载体pShuttle-CMV中,并以PmeⅠ线性化后转化含有人5型腺病毒骨架的BJ5183感受态细胞,通过细菌内同源重组的方式获得重组腺病毒质粒pAdV-BCV-S1,经PacⅠ线性化后转染AD-293细胞获得重组腺病毒rAdV-BCV-S1。利用间接免疫荧光法和western blot法检测该重组腺病毒的S1基因在AD-293细胞中的表达情况,同时用一步生长曲线法,测定该重组腺病毒的复制能力。结果表明:BCV S1基因在感染细胞中获得了高效表达:子代重组腺病毒在感染细胞后60 h滴度最高,为6.8×108 pfu/mL。该重组腺病毒的构建为BCV重组疫苗的研究奠定了基础。

分类号： S852.65

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