猪胞内劳森菌抗体间接ELISA检测方法的建立及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 裴艳艳

作者： 裴艳艳;张梦琳;许浒;相丽润;张洪亮;彭金美;王倩;田志军;周国辉

作者机构：

关键词： 胞内劳森氏菌;间接ELISA;抗体检测;LI0841重组蛋白

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2024 年 001 期

页码： 55-60,69

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 猪增生性肠病（PPE），通常被称为猪回肠炎（PI），由胞内劳森氏菌（LI）感染引起。为建立检测LI抗体的间接ELISA方法，本研究构建LI外膜蛋白基因（LI0841）的重组表达质粒p ET28a-LI0841，经测序无误后转化BL21（DE3）宿主菌，经IPTG诱导表达，采用SDS-PAGE检测重组蛋白LI0841蛋白（rLI0841）的表达形式，经Ni柱纯化后采用western blot鉴定其反应原性。SDS-PAGE结果显示，在32 ku处出现目的条带，且其主要以可溶性形式表达；western blot结果显示，r LI0841能够与兔LI多克隆抗体特异性反应，表明纯化的r LI0841具有较强的反应原性，可作为包被抗原用于建立间接ELISA检测方法，经各反应条件优化初步建立LI抗体的间接ELISA检测方法。各反应条件的优化结果显示，4.38 ng/孔的r LI0841以4℃过夜包被最佳；血清最佳稀释度为1∶100,37℃反应0.5 h；羊抗猪Ig G-HRP最佳稀释度为1∶10 000,37℃作用0.5 h;TMB底物37℃显色15 min。利用建立的间接ELISA方法检测猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、副猪嗜血杆菌、猪链球菌、传染性胸膜肺炎放线杆菌及经美国Biostone PPE抗体检测试剂盒检测为阳性的猪血清，评估该方法的特异性；将LI阳性血清2倍倍比稀释（1∶100～1∶51 200）后，采用本研究建立的间接ELISA方法检测，评估该方法的敏感性；以同一批次和不同批次包被的酶标板分别检测5份不同LI抗体水平的猪血清，评估该方法的重复性。结果显示，该方法除能检测到LI阳性血清外，其余相关病原的阳性血清均为阴性，特异性较强；LI阳性血清1∶800稀释时检测结果仍为阳性，敏感性较高；对5份不同抗体水平的LI阳性血清的批内、批间重复性试验的变异系数均小于10%，重复性较好。利用该ELISA方法与美国Biostone公司PPE抗体检测试剂盒同时检测104份临床猪血清样品，比较二者的检测结果，并计算二者的符合率；采用建立的间接ELISA方法检测黑龙江、吉林等地区413份临床猪血清样品，分析LI在上述地区的流行状况。结果显示，两种方法的阳性符合率为90.91%，阴性符合率为91.84%，总符合率为91.35%;413份临床猪血清样品中LI的阳性检出率为59.81%（247/413），表明LI在黑龙江、吉林等地区的猪群中普遍存在。本研究建立了检测LI抗体的间接ELISA方法，该方法特异性强、敏感性高、重复性与准确性均较好，为临床PI血清流行病学调查提供技术支持。

分类号： S852.61

  • 相关文献

[1]胞内劳森氏菌间接ELISA抗体检测方法的建立及应用. 王丹丹,周俊明,倪艳秀,祝昊丹,朱雪蛟,周金柱,李彬. 2022

[2]基于截短绵羊鹦鹉热衣原体rMOMP183-390蛋白的间接ELISA检测方法建立与应用. 曲磊,朱日宁,鞠安琪,魏天,肖丹,王成宇,王思月,张芳毓,王永志. 2023

[3]猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白的原核可溶性表达和间接ELISA抗体检测方法的初步建立. 王俊,代军飞,马炳,丁耀忠,欧云文,刘永生,赵乐辉,张永光,张杰. 2018

[4]猪瘟病毒结构蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立及评价. 袁莉,杨顺利,尚佑军,贾怀杰,景志忠,刘湘涛,蔡建平,尹双辉. 2018

[5]鸭巴泰病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及部分地区的初步流行病学调查. 刘荣昌,黄瑜,卢荣辉,傅光华,傅秋玲,施少华,万春和,程龙飞,陈红梅. 2016

[6]基于截短MOMP蛋白的绵羊流产衣原体抗体间接 ELISA方法的建立. 刘欣钊,张芳毓,魏天,王成宇,王思月,刘悦,曲可,朱日宁,鞠安琪,马惠海,张建峰,王永志. 2023

[7]猪鼻支原体抗体间接ELISA检测方法的建立及应用. 陈冬杰,危艳武,张志慧,黄立平,吴洪丽,王一平,孙建慧,刘长明. 2014

[8]猪鼻支原体抗体检测间接ELISA方法的建立及其应用. 陈冬杰,危艳武,张志慧,黄立平,吴红丽,王一平,孙建慧,刘长明. 2014

[9]基于Penton蛋白禽腺病毒血清4型间接ELISA抗体检测方法的建立. 李鹏,雷梦瑶,冯丽丽,王振伟,管春晓,郑洪双,王俊茹,王利平,李炎锦,吴欣媛,刘兴友,金前跃. 2024

[10]猪流行性腹泻病毒间接ELISA检测方法的建立. 孙冰,孙杰,徐向伟,俞正玉,郭容利,袁万哲,何孔旺,李彬. 2017

[11]传染性支气管炎病毒抗体间接ELISA检测方法的建立. 高峰,唐应华,宫玉珍,陈涛,陆吉虎,吴培培,傅童生,侯继波. 2012

[12]H3N8亚型马流感病毒间接ELISA抗体检测方法建立及应用. 郭巍,王英原,王宇,张馨心,赵立平,王立群,相文华. 2010

[13]基于牛呼吸道合胞体病毒融合前F蛋白的间接ELISA方法的建立与应用. 王磊,常继涛,于力. 2019

[14]检测鸭1型甲肝病毒抗体间接ELISA方法的建立. 刘伟,傅秋玲,黄瑜,傅光华,陈珍,陈红梅,程龙飞,万春和,施少华. 2015

[15]新型鹅星状病毒ORF2蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及间接ELISA检测方法的建立. 张辛耘,陈连颐,任丹,谢泉,万志敏,李拓凡,叶建强,高巍. 2024

[16]猪胞内劳森氏菌lscN基因的克隆及序列分析. 张敏,尹会方,屠晶. 2017

[17]猪鼻拭子与支气管肺泡灌洗液用于呼吸道分泌性抗体检测. 冯志新,张亚,华利忠,甘源,刘茂军,王海燕,韦艳娜,白昀,王占伟,邵国青. 2013

[18]鸭禽流感抗体血凝抑制试验(HI)的适用性改进. 张存,王一成,孙小梅,俞元明,袁秀芳,叶伟成,刘蔓雯. 2010

[19]猪细小病毒抗体IPMA检测方法的建立及应用. 刘杉杉,赵亚荣,张超范,吕超超,胡泉博. 2011

[20]青海地区丝状支原体山羊亚种的流行病学调查. 韩赟,郭晗,逯忠新. 2010

作者其他论文 更多>>

微信小程序