猪链球菌WC-SS7株GDH基因的表达及GDH蛋白单克隆抗体的制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王淑杰

作者： 王淑杰;徐敏;蔡雪辉;武佳斌;刘永刚;王洪峰;石文达;李丽琴;徐明明;荣福龙

作者机构：

关键词： 猪链球菌;GDH蛋白;原核表达;单克隆抗体

期刊名称： 中国人兽共患病学报

ISSN： 1002-2694

年卷期： 2009 年 25 卷 10 期

页码： 980-983

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的原核表达猪链球菌7型临床分离株WC-SS7的GDH蛋白,制备抗GDH蛋白的单克隆抗体(mAb)。方法将临床分离的猪链球菌7型WC-SS7株的GDH基因克隆入表达载体pET-30a,转入大肠杆菌中,用IPTG诱导表达,用Ni化琼脂糖柱(Pierce)纯化的GDH蛋白免疫BALB/c小鼠,取鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过间接ELISA方法筛选阳性克隆,对抗WC-SS7GDH蛋白单克隆抗体进行特异性鉴定及亚型鉴定。结果表达产物经SDS-PAGE凝胶电泳分析后,在约为52KD处可见一条明显的诱导表达带,说明GDH蛋白得到了正确的表达;细胞融合后检测为阳性的细胞株经过3次单克隆筛选,最终得到了6株能和GDH蛋白反应的能稳定分泌单抗的阳性细胞克隆,这些单抗通过Western鉴定结果显示其具有良好的特异性,6株单克隆抗体亚型鉴定结果显示其亚型均为IgG1型,且轻链均为κ链。结论本研究成功表达了WC-SS7的GDH蛋白,并获得了6株能和GDH蛋白反应的、能稳定分泌单抗的阳性细胞克隆,所获得的重组GDH蛋白及特异性单克隆抗体能用于猪链球菌结构和功能的研究,为猪链球菌临床感染血清学诊断方法的建立奠定基础。

分类号： R378

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