T4溶菌酶在毕赤酵母中的诱导表达及抑菌活性测定(英文)

文献类型： 中文期刊

第一作者： 郝雯静

作者： 郝雯静;李刚强;徐妙云;魏昭荣;陈海敏;刘德虎;艾铁民

作者机构：

关键词： T4溶菌酶;毕赤酵母;电击转化;表达;抗菌活性

期刊名称： Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences

ISSN： 1003-1057

年卷期： 2007 年 01 期

页码： 33-37

摘要： 目的利用毕赤酵母诱导表达T4溶菌酶蛋白并测定其抗菌活性。方法T4溶菌酶(T4lysozyme)基因以N端融合的方式被准确插入到质粒pPIC9K的EcoR I-Not I位点内,得到分泌型重组表达载体 pPIC9K-T4L。该载体首先经限制性内切酶Sal I酶切,进而采用电击方法将线性化的重组质粒DNA导入到毕赤酵母中。经过梯度筛选得到多个单拷贝和多拷贝转化重组子。随机挑取部分重组子PCR扩增阳性克隆,经菌体培养和甲醇诱导后获得了分泌表达,表达产物存在于培养上清液中。结果表达蛋白经琼脂孔扩散抗菌实验显示抑菌圈明显;重组蛋白对金黄色葡萄球菌与肺炎链球菌均具有显著抑制作用;多拷贝与单拷贝重组表达子没有抗菌活性差异与蛋白表达量的差异;加热煮沸对于T4溶菌酶蛋白的抗菌活性无明显影响。结论T4溶菌酶在毕赤酵母中得以成功诱导与表达;表达产物不受拷贝数影响并具热稳定性。

分类号： R96

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