水貂阿留申病毒VP2基因的原核表达及初步应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 徐磊

作者： 徐磊;闫喜军;张蕾;柴秀丽;赵建军;张海玲;高晗;白雪

作者机构：

关键词： 水貂阿留申病毒;VP2基因;原核表达

期刊名称： 中国农学通报

ISSN： 1000-6850

年卷期： 2010 年 26 卷 08 期

页码： 7-11

收录情况： 北大核心

摘要： 将水貂阿留申病毒ADV-G株VP2基因中主要抗原表位区的2个片段,分别克隆至原核表达载体pET-28a(+)的多克隆位点中,鉴定后得到重组质粒pET-VP2a和pET-VP2b,将重组质粒转化到宿主菌BL21中,用IPTG分别以不同浓度,不同诱导时间进行诱导表达,采集样品做SDS-PAGE、Western-blot分析,并以此蛋白作为包被抗原进行ELISA检测。结果发现以终浓度为1mmol/L的IPTG进行诱导,4h后表达可达到高峰,其大小分别约为23kD和28kD,该蛋白与ADV阳性血清能发生特异性反应。将此表达产物应用Ni-NTAHis-Bind纯化系统进行纯化,其纯度可达到91%,纯化后的蛋白以60μg/孔包被96孔板,检测不同地区水貂血清,同时以对流免疫电泳法(CIEP)为对照,结果发现二者的符合率高达93%,而应用该蛋白进行检测其反应更为安全,背景低,制备简单,这为今后应用该蛋白作诊断抗原检测水貂阿留申病奠定了基础。

分类号： S852.65

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