文献类型： 中文期刊
第一作者： 栗永华
作者： 栗永华;刘伟;徐智凯;刘炜玮;孙英杰;仇旭升;谭磊;宋翠萍;廖瑛;丁铲;孟春春
作者机构：
关键词： TIGAR;凋亡;抗凋亡;新城疫病毒;病毒滴度
期刊名称： 畜牧兽医学报
ISSN：
年卷期： 2021 年 002 期
页码： 440-449
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： TP53诱导的糖酵解和凋亡调节因子（TP53-induced glycolysis and apoptosis regulator,TIGAR）是p53下游的靶基因,具有调节糖酵解水平和抗细胞凋亡功能。由于新城疫病毒（NDV）引起细胞死亡是通过诱导凋亡产生,所以提高宿主细胞的抗凋亡水平,有助于延长细胞存活时间进而提高子代病毒的滴度。本研究根据GenBank中预测仓鼠TIGAR基因和鸡TIGAR基因设计引物,分别扩增仓鼠和鸡的TIGAR基因,并构建各自的慢病毒包装质粒,以适合NDV增殖的BHK-21细胞为基础构建稳定过表达TIGAR细胞系（BHK-21-chTIGAR和BHK-21-hamTIGAR）。使用Western blot、DNA测序和qPCR对TIGAR基因表达水平进行鉴定,Western blot和流式仪检测细胞的自然凋亡率。选取新城疫病毒强中弱3种毒株分别感染构建的细胞系,测定病毒滴度。结果显示:重组细胞系BHK-21-chTIGAR细胞和BHK-21-hamTIGAR细胞经过Western blot和DNA测序等检测表明构建成功,TIGAR基因表达量高且无野生型BHK-21细胞污染。qPCR检测细胞系的稳定性结果显示,TIGAR基因在BHK-21细胞中经过30次传代均可稳定表达。Western blot和流式细胞检测结果显示:BHK-21-hamTIGAR细胞的凋亡率低于野生型BHK-21细胞和BHK-21-chTIGAR细胞;病毒生长曲线结果显示:强毒株ZJ1病毒感染BHK-21-hamTIGAR细胞后的TCID50（5.67,72 h）高于BHK-21-chTIGAR细胞（5.53,72 h）和野生型BHK-21细胞（5.27,72 h）;中强毒株SH15病毒感染BHK-21-hamTIGAR细胞后的TCID50（4.90,96 h）要高于BHK-21-chTIGAR细胞（4.57,96 h）和野生型BHK-21细胞（4.67,96 h）;弱毒株LaSota病毒感染BHK-21-hamTIGAR细胞后的TCID50（4.07,96 h）要高于BHK-21-chTIGAR细胞（3.90,96 h）和野生型BHK-21细胞（3.77,96 h）。综上所述,所构建的BHK-21-hamTIGAR细胞系具有明显的抗凋亡功能,且有利于新城疫病毒的高水平复制,有望进一步开发完善成为新城疫病毒疫苗生产所用的细胞株。
分类号： S852.65
- 相关文献
[1]鸡TIGAR基因真核表达质粒的构建及其抗凋亡功能评价. 栗永华,车路平,仇旭升,谭磊,孙英杰,刘炜炜,宋翠萍,廖瑛,丁铲,王金泉,孟春春. 2019
[2]新城疫病毒D90毒株致肺癌A549细胞死亡的方式. 符芳,杨宝峰,宋纯,李曦. 2006
[3]新城疫病毒D90株对肺癌A549细胞的抑制作用. 符芳,李继昌,宋纯,李曦. 2007
[4]改性蒙脱石对断奶仔猪生长性能、血清免疫和抗氧化功能及猪肠上皮细胞的影响. 詹小立,应加富,邓波,吴杰,李静静,刘宇宸,余东游,李卫芬,徐子伟. 2021
[5]急性病毒性坏死病毒IAP-86基因的克隆、表达及抗凋亡研究. 张帅,王崇明,宋晓玲,白昌明,黄捷,李晨. 2014
[6]表达H5N1亚型禽流感病毒HA基因重组腺病毒的遗传稳定性分析及滴度测定. 王青,胡建和,徐彦召. 2010
[7]重组H5N1亚型禽流感病毒NA基因腺病毒的滴度测定及遗传稳定性研究. 胡建和,王青,徐彦召,郑素玲,吴玉苹,杭柏林. 2010
[8]猪伪狂犬病毒Real-time PCR检测方法的建立和弱毒疫苗病毒含量的检测. 华涛,唐波,黄江,常晨,刘国阳,张雪花,侯继波,张道华. 2019
[9]利用鸡胚成纤维细胞培养禽脑脊髓炎病毒的研究. 秦卓明,赵继勋,杨建民,金维江,张世栋,贾强,徐怀英,何叶峰. 2003
[10]提高猪圆环病毒2型产量的方法比较. 华涛,张雪花,唐波,常晨,刘国阳,冯磊,吴培培,张道华,侯继波. 2015
[11]gp64基因相应dsRNA对家蚕核型多角体病毒(BmNPV)增殖的抑制. 夏定国,张国政,王文兵,赵巧玲,唐顺明. 2007
[12]细胞培养对PRRSV-SD分离株滴度的影响. 吴家强,颜世敢,胡北侠,任素芳,黄艳艳,张秀美. 2002
[13]不同储存条件和反复冻融次数对口蹄疫病毒滴度的影响. 孔洁,李亭玉,李太元,常惠芸. 2019
[14]猪黑色素瘤分化相关基因5(MDA5)对口蹄疫病毒感染宿主的影响. 常兴妮,崔晓蕊,孙鹏,马凯凯,胡高维,杨建设,丁艳平,李志勇. 2017
[15]山羊痘病毒TK基因功能缺失对其增殖的影响. 李继东,才学鹏. 2017
[16]Ⅱ型草鱼呼肠孤病毒三种定量检测方法的比较与评价. 曾伟伟,王英英,尹纪元,汤亚方,李莹莹,王庆,高彩霞,任燕,刘春,石存斌. 2019
[17]高增殖性能犬流感CIV-PR8重组病毒的制备. 周洁文,滕巧泱,闫丽萍,边延峰,张旭,徐大伟,石迎,周雨霞,李泽君. 2012
[18]表达H5N1亚型禽流感病毒HA基因重组腺病毒的遗传稳定性分析及滴度测定. 王青,胡建和,徐彦召. 2010
[19]PRRSV强、弱毒株Nsp9基因对PRRSV复制的影响. 赵孟孟,冯丽丽,冯松林,马红芳,张二芹,王文佳,邢星,张雅,冯嘉萍,张桂红. 2017
[20]靶向FMDV受体猪源整联蛋白α_V亚基基因抑制FMDV复制的最佳siRNA筛选. 骆继怀,独军政,高闪电,张国锋,常惠芸. 2011
作者其他论文 更多>>
-
可栽培黄色羊肚菌品种的鉴定与系统发育分析
作者：张文昌;孙文化;王海彦;尹琪;孔维丽;何培新;刘伟
关键词：羊肚菌;支系;驯化栽培;系统发育学种;Mes-21
-
不同形态氮素对苜蓿芽苗菜产量及品质的影响
作者：裴宝路;刘伟;谢龙;蔡梓轩;李宁;魏学军
关键词：苜蓿;芽苗菜;硝态氮;氨态氮;氨基酸态氮;生长;产量;可溶性蛋白
-
超高压杀菌技术对剁辣椒品质的影响
作者：林树花;肖诗军;唐琪;王新宇;刘伟;张菊华
关键词：剁辣椒;超高压杀菌;微生物;挥发性风味成分
-
田间高温对不同架式葡萄抗氧化及光合特性的影响
作者：罗玲;刘伟;梁东;李然;马一君;吕秀兰
关键词：高温;架式;葡萄;抗氧化系统;光合荧光
-
猫白血病病毒的研究进展
作者：庞帅赛;朱世强;刘光清;孟春春
关键词：猫白血病;结构;致病机理;预防
-
马铃薯块茎理化特性、蒸制品质与阻抗特性的相关性分析
作者：赵人杰;赵瑞璇;刘倩楠;王英飒;白小东;刘伟;胡宏海
关键词：马铃薯块茎;淀粉理化特性;细胞结构;蒸制;质构;电阻抗;相关性分析
-
BrGOLDEN基因调控大白菜金黄色内叶的遗传和分子机制研究
作者：宋超;章时藩;李菲;张慧;孙日飞;刘伟;李国亮;张淑江
关键词：大白菜;类胡萝卜素;金黄心;橘红心;调控机制;遗传规律;分子标记;生物育种
