金针菇漆酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达研究

文献类型： 中文期刊

第一作者： 张银波

作者： 张银波;姜琼;江木兰;马立新

作者机构：

关键词： cDNA末端快速扩增;基因组步行;漆酶基因;毕赤酵母;分泌表达

期刊名称： 微生物学报

ISSN： 1005-7021

年卷期： 2004 年 44 卷 06 期

页码： 775-779

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 综合运用cDNA末端快速扩增 (RapidAmplificationofcDNAEnds ,RACE )和基因组步行等技术克隆到一个金针菇 (Flammulinavelutipes)的漆酶结构基因和其对应的全长cDNA ,经测序和BLAST比对分析表明该基因属于多铜氧化酶基因家族 ,与已发表的漆酶基因 (AF176 2 30 )的同源性最高 ,在氨基酸水平为 72 %。该结构基因命名为gl ccFv,cDNA命名为lccFv ,其序列提交GenBank ,登录号分别为AY4 85 82 6和AY4 5 0 4 0 6。将lccFv的开放阅读框克隆到毕赤酵母表达载体pHBM90 6 ,转化毕赤酵母GS115且实现了分泌表达。将重组毕赤酵母GS115 (pHBM5 6 5 )诱导产酶 ,在培养温度 2 0℃、甲醇流加量为 1 0 % (V V)的情况下 ,其分泌表达的LCCFv的最高酶活为 0 10 70U mL ,最适反应温度为 4 5℃ ,最适反应pH值为 3 9,在最适反应条件下其热稳定性和pH值稳定性均较好

分类号： Q785

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