牛呼吸道合胞体病毒核蛋白的表达及其单克隆抗体的制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 马磊

作者： 马磊;朱远茂;蔡红;王姝;史鸿飞;吕闯;董秀梅;高欲燃;薛飞

作者机构：

关键词： 牛呼吸道合胞体病毒;核蛋白;单克隆抗体;特异性

期刊名称： 中国生物工程杂志

ISSN： 1671-8135

年卷期： 2012 年 32 卷 12 期

页码： 20-24

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)接种牛肺细胞(BL),提取病毒RNA。通过RT-PCR扩增BRSV的核蛋白基因,然后定向克隆到原核表达载体pET30a,获得重组表达质粒pET30a-N。将重组质粒转化表达菌BL21(DE3),经增菌培养和IPTG诱导以及SDS-PAGE和Western blot分析,成功表达出了核蛋白(N),其分子量约为49kDa。为制备BRSV核蛋白的单克隆抗体,用纯化的重组核蛋白免疫BALB/c小鼠,取免疫鼠脾细胞与SP2/0细胞融合。采用以BRSV为检测抗原的间接ELISA筛选阳性细胞克隆,经3次克隆纯化后获得2株稳定分泌抗N特异性MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为2D12与4B10。用2D12与4B10杂交瘤细胞株接种BALB/c小鼠制备腹水,采用rN及BRSV包被的ELISA测得的效价分别是1×105和1×106及1×102和1×103。间接ELISA、Western blot、IFA试验表明两株杂交瘤细胞所分泌的MAb具有良好的反应性和特异性。经抗体亚类鉴定D12与4B10均为IgG1/κ。特异性试验表明单抗2D12与4B10均不与牛副流感病毒3型和牛病毒性腹泻病毒反应。所制备的D12与4B10可用于建立检测BRSV病原及抗体的诊断方法。

分类号： S858.23

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