文献类型： 中文期刊
第一作者： 王锦明
作者： 王锦明;刘爱红;任巧云;马米玲;刘志杰;李安岩;李有全;赵帅阳;张浩浩;殷宏;罗建勋;关贵全
作者机构：
关键词： 巴贝斯虫;RACE;滑动体;克隆;表达;多克隆抗体
期刊名称： 中国农业科学
ISSN： 0578-1752
年卷期： 2013 年 46 卷 10 期
页码： 2175-2182
收录情况： CSCD
摘要： [目的]克隆和表达莫氏巴贝斯虫滑动体组件蛋白GAP45(gliding associated protein 45,GAP45)、GAP50(gliding associated protein 50,GAP50)、肌球蛋白A(Myosin A,Myo A)和肌球蛋白轻链(myosin lightchain,MLC)基因及制备兔源性多克隆抗体。[方法]利用末端快速扩增(rapid-amplification of cDNA ends,RACE)技术从莫氏巴贝斯虫裂殖子cDNA中扩增gap45、gap50、myo A及mlc基因,将获得的全长或基因的部分序列构建pGEX-4T-1原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)pLys中用IPTG诱导表达;融合蛋白经纯化后免疫家兔,制备多克隆抗体,并用ELISA测定抗体的效价及反应性。[结果]获得了gap45、gap50、myo A和mlc基因的全长分别为664、1391、773和2 538 bp,开放阅读框长度分别为567、1194、606和2 514 bp,制备的多克隆抗体具有较好的特异性,效价高于1:25 600。[结论]克隆了滑动体组件蛋白gap45、gap50、myo A和mlc基因的全长,并制备了多克隆抗体,为筛选巴贝斯虫疫苗和诊断用抗原和药物靶位、研究其生物学入侵机制奠定了基础。
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