猪圆环病毒2型Rep和Rep’蛋白免疫原性及其抗体中和活性的测定

文献类型： 中文期刊

第一作者： 刘丹

作者： 刘丹;王一平;危艳武;唐青海;吴洪丽;刘建波;李胜斌;魏萍;刘长明

作者机构：

关键词： 猪圆环病毒2型;Rep和Rep’蛋白;杆状病毒表达;免疫原性;中和活性

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2012 年 12 期

页码： 1216-1223

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为了构建表达PCV2Rep和Rep’蛋白的重组杆状病毒,采用高保真PCR法从病毒感染细胞中扩增Rep和Rep’蛋白基因,并克隆到杆状病毒转移载体(pBlueBac4.5/V5-His-TOPO)。将重组质粒与线性化杆状病毒DNA共转染昆虫细胞(Sf21),经同源重组和蚀斑筛选,获得2株高效表达PCV2Rep和Rep’蛋白的重组杆状病毒。经3次克隆的重组毒株的毒价达3.0×107 PFU/mL和7.0×107 PFU/mL。蛋白表达产物分析表明,PCV2Rep和Rep’蛋白分子质量为36.0ku和20.4ku,分别占总蛋白含量的6.2%和10.1%。免疫活性分析表明,这2种重组蛋白均可与PCV2特异性抗体产生反应,具有良好的反应原性。用Ni-NTA亲和层析法纯化这2种重组蛋白,纯度分别为92.5%和93.6%。用纯化的2种蛋白免疫小鼠,经间接ELISA检测,血清抗体效价高达1∶51 200。以抗这2种蛋白的抗体进行的IPMA试验表明,它们均能特异性识别PCV2感染细胞中的Rep和Rep’蛋白抗原。病毒血清中和试验证实,抗Rep和Rep’蛋白抗体均无中和病毒活性。本研究表达的重组PCV2Rep和Rep’蛋白,为探讨该病毒复制机制奠定了基础,也为PCV2Cap亚单位疫苗与自然野毒感染间的鉴别诊断开辟了新途径。

分类号： S852.659.2

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