水貂阿留申病毒串联表位重组抗原的表达及血清学初步评价

文献类型： 中文期刊

第一作者： 秦飞燕

作者： 秦飞燕;孙杰;马凡舒;王洋;柏玲;张蕾;闫喜军

作者机构：

关键词： 阿留申病毒;VP2蛋白;表位基因;原核表达;CIEP;ELISA

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2019 年 39 卷 11 期

页码： 2135-2139+2151

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为探究水貂阿留申病毒(ADV)VP2主要抗原表位在水貂阿留申病血清学诊断中的作用,本试验将VP2蛋白主要抗原区的表位基因用柔性肽串联连接,将其克隆到表达载体pET-30a(+)中进行原核表达,并对诱导条件进行优化。利用Ni-NTA His-Bind纯化系统对融合蛋白进行纯化,经SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物,并将融合蛋白作为检测抗原进行CIEP试验。结果显示,融合蛋白在IPTG终浓度为1 mmol/L、37℃诱导表达4 h,蛋白表达量最高,其大小约为30 000,以可溶性表达形式为主;融合蛋白能与6×His单克隆抗体及ADV多克隆抗体发生特异性反应,说明该蛋白具有较好的反应原性;且该蛋白作为对流免疫电泳技术(CIEP)检测抗原与ADV阳性血清之间产生了明显的沉淀线,证实了该蛋白作为CIEP检测抗原的可能性。以纯化后的重组蛋白为抗原初步建立的间接ELISA方法具有较高的准确性。结果表明该蛋白具有良好的血清学检测价值,为水貂阿留申病血清学诊断方法的建立奠定了基础。

分类号： S852.65

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