人分化抑制因子Id-2基因在大肠埃希氏菌中的高效表达及其多克隆抗体的制备

文献类型： 中文期刊

第一作者： 童铁钢

作者： 童铁钢;林燕;穆丹梅;白宇;杨木蕾;郑敏;吴东来

作者机构：

关键词： 人Id-2基因;基因表达;多克隆抗体

期刊名称： 南方医科大学学报

ISSN： 1673-4254

年卷期： 2009 年 06 期

页码： 14-17+30

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的在大肠杆菌中表达人Id-2与谷胱甘肽-S转移酶(GST)的融合蛋白,并制备抗人Id-2的多克隆抗体。方法从乳腺癌组织中提取总RNA,用RT-PCR扩增出Id-2基因的编码序列,克隆至表达载体pGEX-6P-1中,重组质粒经PCR、酶切、测序鉴定后,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达获得GST-Id-2蛋白,SDS-PAGE分析表达产物。通过亲和层析法纯化表达的GST-Id-2融合蛋白,Western-Blot检测重组抗原的免疫原性,并以此为抗原制备多克隆抗体。结果经PCR、酶切、测序鉴定证明,Id-2基因已正确克隆至pGEX-6P-1中,经IPTG诱导后,表达出相对分子质量40000的GST-Id-2融合蛋白。Western-Blot、ELISA和琼脂双向扩散实验鉴定所制备的多克隆抗体可以与GST-Id-2特异性反应。结论Id-2基因在在大肠杆菌中的成功表达及制备的多克隆抗体,为检测Id-2及其在各种组织中的表达提供了一种检测方法,也为分析Id-2分子结构及抗原表位奠定了基础。

分类号： R392.1

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