与CYPOR共表达CYP2D6~*1和CYP2D6~*10及其代谢活性比较
文献类型: 中文期刊
第一作者: 钱鸣蓉
作者: 钱鸣蓉;陈静;刘瑶;余露山;陈枢青
作者机构:
关键词: 昆虫表达系统;细胞色素P4502D6*1;细胞色素P4502D6*10;细胞色素氧化还原酶;代谢差异
期刊名称: 药学学报
ISSN: 0513-4870
年卷期: 2011 年 02 期
页码: 207-212
收录情况: 北大核心 ; CSCD
摘要: 细胞色素P450 2D6(cytochrome P450 2D6,CYP2D6)是一种重要的氧化代谢酶,呈基因多态性,对药物的代谢呈现明显的个体差异和种族差异,CYP2D6*10在中国人群中的发生率高达51.3%。采用杆状病毒昆虫表达系统,采用与细胞色素氧化还原酶(cytochrome oxidoreductase,CYPOR)共表达的方式获得具有代谢活性的CYP2D6*1/CYP2D6*10,并初步研究其催化右美沙芬的代谢活性差异。构建重组质粒pFastBac-CYP2D6*1,pFastBac-CYP2D6*10和pFastBac-CYPOR,并分别转化DH10Bac菌株构建重组Bacmid-CYPOR,Bacmid-CYP2D6*1和Bacmid-CYP2D6*10,转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒用于病毒扩增和感染Sf9昆虫细胞。通过测定混悬蛋白催化右美沙芬的速率来优化重组CYPOR和CYP2D6病毒感染Sf9昆虫细胞的感染复数(multiplicity of infection,MOI)值和其比例,获得活力较高的重组CYP2D6*1和CYP2D6*10。重组CYP2D6*1催化右美沙芬的Km为(26.67±2.71)μmol·L-1(n=3),Vmax为(666.7±56.78)pmol·nmol-1(CYP2D6)·min-1(n=3),清除率为25.0;CYP2D6*10催化右美沙芬的Km为(111.36±10.89)μmol·L-1(n=3),Vmax为(222.2±20.12)pmol·nmol-1(CYP2D6)·min-1(n=3),清除率为2.0。利用杆状病毒昆虫细胞系统表达的重组CYP2D6*1和CYP2D6*10代谢药物具有活性差异,可用于体外研究其催化某些药物的代谢差异,这有助于理解药物代谢的个体差异、预测药物之间的相互作用。
分类号: R969
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