禽流感病毒RNA聚合酶串联亲和纯化方法的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李印

作者： 李印;邓国华;崔佳莹;于洋;丁晴微;陈化兰

作者机构：

关键词： H5亚型禽流感;RNA聚合酶复合体;串联亲和纯化

期刊名称： 中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集

ISSN：

年卷期： 2010 年

页码： 3

收录情况： CSCD

摘要： 本实验利用TRIzolLsReagent从感染鸡胚尿囊液中提取流感病毒核酸,经过反转录PCR和常规PCR方法扩增出禽流感毒株A/Duck/Guangxi/35/01(H5N1)的PB1蛋白、PB2蛋白和PA蛋白的cDNA。将PB2扩增基因连接在pCDNATAP载体上,PB1和PA扩增基因连接至pCNDNA3A载体上构建了pCDNA-35PB2TAP、pCDNA-35PB1和pCDNA-35PA质粒。利用构建的真核表达质粒共转染293T细胞,经过串联亲和纯化方法得到了流感病毒依赖RNA的RNA聚合酶复合体(RdRp)。利用RNA体外合成实验证明纯化得到的RdRp具有正常的生物学活性。

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