定向引入N-糖基化位点促进芳基醇氧化酶热稳定性及底物亲和力

文献类型： 中文期刊

第一作者： 曹查

作者： 曹查;朱作华;龚文兵;周映君;谢纯良;彭源德

作者机构：

关键词： 芳基醇氧化酶;N-糖基化;定点突变;重组表达;酶学性质

期刊名称： 食品研究与开发

ISSN： 1005-6521

年卷期： 2024 年 45 卷 007 期

页码： 165-173

收录情况： 北大核心

摘要： 芳基醇氧化酶在木质素降解过程中发挥重要作用,N-糖基化修饰影响其酶学性质.该文旨在通过研究刺芹侧耳(Pleurotus eryngii)来源的芳基醇氧化酶N-糖基化,来提高其热稳定性和底物亲和力.利用毕赤酵母GS115表达系统和定点突变技术,构建表达6种芳基醇氧化酶突变体蛋白,并对纯化后的野生型和突变体酶进行酶学性质和热稳定性分析.结果表明,芳基醇氧化酶N89和N249糖基化位点突变导致最适温度和70 ℃时酶热稳定性降低;在这个过程中,将其引入新的糖基化位点后的突变体,其最适酸碱度没有变化,最适温度以及70 ℃下的热稳定程度都明显优于野生型;以藜芦醇为底物时,突变体[AAO(F-X-N-X-T)]与底物亲和力最高.N-糖基化主要影响芳醇氧化酶的热稳定性,其中N89和N249位点的N-糖基化对酶的热稳定性起重要作用;引入N-糖基化位点[AAO(F-X-N-X-T)]能获得具有高活力和高稳定性的芳醇氧化酶.

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