澳洲石斛萜类合成酶基因DkTPS7的克隆与表达分析

文献类型： 中文期刊

第一作者： 孔兰

作者： 孔兰;叶秀仙;林榕燕;林兵;钟淮钦

作者机构：

关键词： 石斛;顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用法(HS-SPME-GC-MS);香气;萜类合成酶;基因克隆;亚细胞定位;表达分析

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2024 年 40 卷 012 期

页码： 160-169

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】萜类合成酶(terpene synthase,TPS)是参与萜类物质合成的关键酶，在植物花香形成中具有重要作用。探究TPS基因在石斛花香气形成中的作用，为进一步了解不同时期石斛花香气的动态变化及其形成机制提供参考。【方法】采用顶空固相微萃取方法结合气相色谱-质谱联用技术，比较不同时期澳洲石斛花的香气成分差异；利用RT-PCR技术克隆DkTPS7，并进行生物信息学分析；利用农杆菌介导的瞬时转化系统检测其亚细胞定位；利用RT-qPCR技术检测其在不同品种、不同花发育时期和日变化中的表达模式。【结果】澳洲石斛中共检测到523种香气物质，萜类化合物是该品种香气中最丰富的挥发物。DkTPS7的开放阅读框(open reading frame,ORF)为1 797 bp，编码598个氨基酸，含有3个萜类合成酶家族的保守结构域，属于TPS-b亚家族；亚细胞定位分析显示，DkTPS7定位于质体。RT-qPCR结果显示，DkTPS7的表达具有品种特异性，在澳洲石斛中高表达，‘杂交紫花’和麝香品种中几乎不表达；DkTPS7在始花期的澳洲石斛花中的表达量最高，盛花期次之；1 d中，DkTPS7基因表达量变化呈现先升后降的趋势。【结论】从澳洲石斛花中克隆得到DkTPS7基因，其表达具有品种和时空特异性，且其表达模式与单萜类香气物质的积累趋势一致。

分类号： S567.239

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