鸡法氏囊B淋巴细胞三框cDNA表达文库的构建

文献类型： 中文期刊

第一作者： 高玉龙

作者： 高玉龙;刘伟;高宏雷;邓小芸;李铁强;王笑梅;沈荣显

作者机构：

关键词： 三框cDNA文库;cDNA表达文库;法氏囊;B淋巴细胞;传染性法氏囊病毒(IBDV)

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2008 年 30 卷 01 期

页码： 10-14

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 分离纯化3周龄SPF鸡法氏囊B淋巴细胞的mRNA,以5'端生物素标记的Oligo(dT)primer为引物反转录后连接3种读码框的Adapter,层析柱分级纯化,通过BP重组反应分别构建3种读码框的cDNA入门文库,平均滴度分别为1×105CFU/mL、1×105CFU/mL、1.2×105CFU/mL,文库总容量分别为1.2×106CFU、1.2×106CFU、1.5×106CFU,平均插入片段分别为1270bp、1190bp和1120bp,阳性重组率均为100%。将3种读码框的cDNA入门文库扩增后提取质粒,取等量的质粒通过LR重组反应将入门文库转换为三框表达文库,经测定平均滴度为1×105CFU/mL,文库总容量为1.2×106CFU,平均插入片段为1017bp,阳性重组率为100%。结果表明所构建的三框cDNA表达文库具有较高的重组率和较大的库容量,为进一步筛选鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)在法氏囊B淋巴细胞中的受体及研究细胞嗜性奠定了基础。

分类号： S852.4

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