抗H5N1禽流感病毒M1蛋白全人源胞内抗体的制备及纯化

文献类型： 中文期刊

第一作者： 蔄弘扬

作者： 蔄弘扬;孙赫;田园;吴广谋;张国利;邱月;王瑜;张文慧;岳玉环

作者机构：

关键词： H5N1禽流感病毒;M1蛋白;全人源抗体;胞内抗体

期刊名称： 中国生物制品学杂志

ISSN： 1004-5503

年卷期： 2022 年 010 期

页码： 1200-1204

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的 制备抗H5N1禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）M1蛋白全人源胞内抗体TAT-ScFv M1-mFc，并进行纯化。方法 从pET28（a）-TAT-ScFv M1质粒中通过PCR扩增目的基因片段TAT-ScFv M1，将该片段与表达载体pET32（a）-HisTag-Sumo-mFc连接，构建重组表达质粒pET32（a）-HisTag-Sumo-TAT-ScFv M1-mFc，转化大肠埃希菌BL21（DE3）中，IPTG诱导表达目的蛋白。通过金属螯合层析、Sumo酶切及亲和层析等方法对目的蛋白进行纯化，ELISA法检测抗体的亲和活性。结果 重组表达质粒经双酶切及测序鉴定证明构建正确。重组蛋白以包涵体形式表达，相对分子质量约80 000。制备的胞内抗体具有明显结合M1蛋白的活性。结论 获得了具有亲和活性的抗H5N1AIV M1蛋白的全人源胞内抗体蛋白TAT-ScFv M1-mFc，为进一步开发针对AIV H5N1的抗体药物奠定了基础。

分类号： R392-33

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