利用SMART技术构建新吉细毛羊皮肤组织全长cDNA文库

文献类型： 中文期刊

第一作者： 吴茜

作者： 吴茜;田可川;刘武军;张艳花;吴伟伟

作者机构：

关键词： 新吉细毛羊;皮肤组织;cDNA文库;SMART技术

期刊名称： 西北农林科技大学学报(自然科学版)

ISSN： 1671-9387

年卷期： 2010 年 38 卷 05 期

页码： 46-50+55

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】探寻控制羊毛性状的相关基因,构建了新吉细毛羊皮肤组织全长cDNA文库。【方法】采用Clontech公司的CreaterTM SMARTTM cDNA library construction kit,用Biozol试剂提取新吉细毛羊皮肤组织总RNA后,以反转录酶SuperscriptTMⅡ反转录为第一链cDNA,然后通过LD-PCR合成并扩增ds cDNA,扩增产物经纯化、SfiⅠ酶切、过CHROMA SPIN-400柱去除小片段后,连接到SfiⅠ消化过的pDNR-LIB(带有SfiⅠA和B 2个位点)质粒载体中,最后用热击转化法将重组质粒转化到E.coliDH5α内,得到新吉细毛羊皮肤组织全长cDNA原始文库,扩增后的文库分装后用50 mL离心管保存。【结果】构建的cDNA文库约含4.2×105个独立克隆,重组效率为100%,插入片段多为0.5~3.0 kb,平均插入片段长度为1.3 kb,符合建库要求。【结论】经检测所构建的文库库容量满足基因筛选要求,可用于特异表达基因全长序列。

分类号： S826.89

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