马铃薯黑痣病菌实时荧光定量PCR检测体系的建立及应用

文献类型： 中文期刊

第一作者： 李磊

作者： 李磊;陈利达;黄艺烁;谢学文;石延霞;柴阿丽;李宝聚

作者机构：

关键词： 马铃薯黑痣病;实时荧光定量PCR;水筛法;土壤检测

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN：

年卷期： 2021 年 007 期

页码： 1417-1425

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）是马铃薯（Solanum tuberosum）黑痣病的病原菌,严重威胁着马铃薯产业的发展。立枯丝核菌在土壤中主要以菌核结构作为初侵染源进行潜伏休眠,其密度与马铃薯黑痣病的发病程度呈正相关。为快速准确地检测土壤中立枯丝核菌和菌核的密度,本研究基于立枯丝核菌融合群3 （anastomosis group 3, AG3）的翻译延长因子（translation elongation factor, TEF）保守区域,设计特异性引物TEF3/TEF7,以191-bp扩增产物的重组质粒为标准品,构建实时荧光定量PCR （real-time quantitative PCR, qPCR）检测体系,其灵敏度（19.5 fg/μL）为普通PCR 1 000倍。采用普通PCR和qPCR方法,对4个地区的疑似马铃薯黑痣病薯（18份）和病土（41份）的DNA进行检测,2种检测方法对马铃薯黑痣病薯的检出率均为100%;普通PCR对病土的检出率为65.85%,qPCR对病土的检出率为97.56%。为明确田间早期病土检测的带菌量,人工模拟不同带菌核量的土壤,结合水筛法进行qPCR检测,建立循环域值（cycle threshold, Ct）与土壤中菌核含量的曲线关系,回归方程为y=-3.982x+12.687,相关系数R2为0.986,呈良好线性关系;人工模拟带菌量检测下限为每克土5×10-6 g。本研究建立的检测体系能够快速、准确地检测土壤中立枯丝核菌AG3的菌核密度。在种植前对大田土壤中立枯丝核菌含量进行定量检测,可为马铃薯黑痣病的早期预警提供技术支持。

分类号： S435.32

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