LNA 探针实时荧光定量PCR 检测小麦矮缩病毒体系的建立

文献类型： 中文期刊

第一作者： 王亮

作者： 刘艳;王锡锋

作者机构：

关键词： 小麦矮缩病毒;LNA 探针;荧光定量PCR;检测

期刊名称： 植物病理学报

ISSN： 0412-0914

年卷期： 2016 年 46 卷 3 期

页码： 313-319

收录情况： CSCD

摘要： 本研究通过对多个小麦矮缩病毒(Wheat dwarf virus,WDV)小麦分离物进行序列分析,在编码Rep蛋白N端的基因保守区域设计一对特异性引物和一条长度为19 bp的TaqMan LNA探针,经过探针和引物浓度的系列优化,建立了WDV田间样品LNA探针实时荧光定量PCR检测方法,确定最优反应条件下的引物和探针终浓度分别为0.5 μmol /L和0.3 μmol /L。该方法建立的标准曲线斜率及相关系数分别为-3.424 3和0.997 3,扩增效率为96.0%,重复性试验组内变异系数为0.11%~ 1.34%,组间变异系数为0.44%~ 1.21%,最低检测限为55 copies /μL,其灵敏度是普通PCR的100倍以上。与普通TaqMan探针荧光定量PCR相比,该方法所用探针长度大大缩短,减少了探针间形成二级结构的机会,探针设计更加简单、方便。该方法适用于田间样品的早期监测,为病害流行调查提供了高效快捷的技术支撑。

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